GLP-1對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠胰島β細(xì)胞自噬的影響及其機(jī)制.pdf

1、目的：
　　本研究擬探討胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）是否通過調(diào)節(jié)自噬水平影響高脂飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的2型糖尿病小鼠的胰島β細(xì)胞的功能。
　　方法：
　　取6周齡雄性c57BL/6J小鼠為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象，按照飼養(yǎng)方式及干預(yù)時(shí)間分為2大實(shí)驗(yàn)組：1.高脂組：A組：LFD（低脂飲食+生理鹽水皮下注射）；B組：高生（高脂飲食+生理鹽水皮下注射）；C組：GLP-1處理2周（高脂飲食+GLP-1皮下注射2周）；

2、D組：GLP-1處理6周（高脂飲食+GLP-1皮下注射6周）；2.糖尿病組：A組：LFD（低脂飲食+生理鹽水）；B組：DM+生理（高脂飲食+STZ+生理鹽水）；C組：DM+GLP-1處理2周（高脂飲食+STZ+GLP-1干預(yù)2周）；D組：DM+GLP-1處理6周（高脂飲食+STZ+GLP-1干預(yù)6周）。糖尿病造模方法為：高脂干預(yù)8周+STZ5天，一周后血糖大于16.7 mmol/L為模型成功，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。分別于GLP-1干預(yù)2周及6周

3、時(shí)給予腹腔注射行葡萄糖耐量試驗(yàn)和胰島素耐量試驗(yàn)，并計(jì)算其曲線下面積。干預(yù)結(jié)束后處死小鼠，留取肝臟、胰腺等組織標(biāo)本；HE染色觀察其形態(tài)學(xué)改變；PCNA免疫組化染色觀察其增值情況；胰島素、胰高血糖素、LC3、P62免疫熒光染色了解其胰島分泌及自噬情況。
　　結(jié)果：
　　1.高脂組結(jié)果：
　?、僦曫B(yǎng)8周后，高脂組（B組）小鼠體重顯著大于低脂飼養(yǎng)組（A組）小鼠體重（P＜0.05）；給予GLP-1干預(yù)6周后，小鼠體重顯著降低（

4、P＜0.05）。
　?、?IPGTT及 ITT實(shí)驗(yàn)結(jié)果：GLP-1干預(yù)前，高脂組（B組）與低脂對(duì)照組（A組）相比，糖負(fù)荷后30 min血糖高于A組（P＜0.05）；給予GLP-1干預(yù)后，GLP-1干預(yù)組（D組）糖負(fù)荷后15 min、30 min、60 min血糖顯著低于高脂組（B組）（P＜0.05）。ITT：GLP-1干預(yù)前B組30 min血糖高于A組血糖（P＜0.05），四組ITT其他各時(shí)間點(diǎn)血糖無差異（P＞0.05）；GLP-

5、1干預(yù)后，D組各時(shí)間點(diǎn)血糖值均低于B組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　?、?HE染色顯示：與 A組比較，B組肝臟有脂肪變性，GLP-1干預(yù)后可減輕；與A組比較B組胰島內(nèi)偶見脂滴空泡，胰島細(xì)胞之間出現(xiàn)一定間隙，可見散在單個(gè)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，C組與B組無明顯差異，D組脂肪變性有所減輕。
　?、芤葝uβ細(xì)胞增值情況：B組與A組比較PCNA表達(dá)增加，B組、C組之間無差異，D組PCNA表達(dá)較B組進(jìn)一步增加（P＜0.05）。
　

6、?、菀葝uLC3、P62表達(dá)：B組LC3表達(dá)較A組增高，給予GLP-1后，C、D組LC3表達(dá)進(jìn)一步增高；B組與A組比P62表達(dá)降低，給予GLP-1后，C、D組P62表達(dá)進(jìn)一步降低。
　　2.糖尿病組結(jié)果：
　?、偬悄虿≡炷＃翰捎酶咧桂B(yǎng)8周，聯(lián)合小劑量STZ腹腔注射，STZ：50 mg/Kg/d，連續(xù)5天注射（成模率：100％，死亡率：0%）。
　?、?IPGTT及 ITT實(shí)驗(yàn)結(jié)果：IPGTT：GLP-1干預(yù)后，C組空腹

7、及糖負(fù)荷后60 min時(shí)血糖低于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；ITT：GLP-1干預(yù)后，C組30 min、60 min、120 min時(shí)血糖低于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意（P＜0.05）。C組與D組血糖無明顯差異。
　?、?HE染色顯示：與A組比，B組肝細(xì)胞脂肪變性、壞死、炎細(xì)胞浸潤(rùn)，C、D組與B組比較有所減輕，D組脂肪變性及炎細(xì)胞浸潤(rùn)較 C組減輕；B、C、D組胰島形態(tài)改變，細(xì)胞壞死、炎細(xì)胞浸潤(rùn)，以B組最為嚴(yán)重。
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8、胰島β細(xì)胞增值情況：A、D組 PCNA表達(dá)略微高于 B、C組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　?、菀葝uLC3、P62表達(dá)：B組LC3與A組相比有所降低（P＜0.05），給予GLP-1后，D與B組相比LC3增高（P＜0.05）；B組與A組相比P62表達(dá)水平增高（P＜0.05）；給予GLP-1后，D與B組相比P62有所降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.在高脂組，高脂飲食可使小鼠胰腺及肝臟出現(xiàn)脂肪變性；且高脂