胰島素抵抗與脂聯(lián)素基因敲除對小鼠心臟重構(gòu)的影響.pdf

1、目的：
　　觀察野生小鼠和脂聯(lián)素基因敲除(APNKO)小鼠是否可導(dǎo)致心臟重構(gòu)，以及胰島素抵抗(IR)和脂聯(lián)素(APN)缺乏是否可進(jìn)一步加重所致的心臟重構(gòu)。
　　方法：
　　選擇16只野生 C57小鼠隨機(jī)分為對照組(Control組)和胰島素抵抗組(IR組)，16只脂聯(lián)素基因敲除小鼠隨機(jī)分為脂聯(lián)素基因敲除組(APNKO組)和脂聯(lián)素基因敲除+胰島素抵抗(APNKO+IR組)，其中Control組和APNKO組給予普通飼料，

2、其余兩組給予高脂飼料誘導(dǎo)產(chǎn)生胰島素抵抗。飼養(yǎng)各組小鼠12周，測量小鼠體重(BW),給予禁食禁水12小時，采集鼠尾末端測量空腹血糖(FPG)，取血清測量用自動生化儀測量血清甘油三酯(TG)及膽固醇(TC)的濃度，用Elisa法測量空腹胰島素(FINS)以及血清APN的濃度，并計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。取出心臟，分離左心室，稱取全心重量(HW)以及左心室重量(LVW)，并計算全心重量指數(shù)(HWI)和左心重量指數(shù)(LVWI)。用分

3、離的左心室做HE染色觀察心肌結(jié)構(gòu)的改變情況，用Masson染色觀察心肌纖維化的程度，并計算心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)和血管周圍膠原面積(PVCA)的含量以評價血管周圍纖維化程度。用免疫組化和Western Blot的方法檢測心肌APN及脂聯(lián)素受體1(AdipoR1)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的表達(dá)水平。采用實(shí)時熒光定量PCR法(RT-PCR)測定心肌APN及AdipoR1的mRNA表達(dá)。對心肌MMP-9的表達(dá)與HOMA-IR、血清

4、APN水平、心肌APN和AdipoR1的關(guān)系用相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：
　　1、析因分析結(jié)果如下。脂聯(lián)素基因敲除與胰島素抵抗對BW、HW、LVW、HWI和LVWI無交互效應(yīng)(P>0.05)。脂聯(lián)素基因敲除與胰島素抵抗對 FPG、FINS、CVF、PVCA、血清及心肌APN，心肌APN受體1、心肌MMP-9有交互效應(yīng)(P>0.05)。
　　2、HE染色：Control組小鼠可觀察到排列整齊、形態(tài)正常、界限清晰的心肌細(xì)胞及

5、胞間結(jié)構(gòu)。IR組和APNKO組小鼠心肌細(xì)胞胞間結(jié)構(gòu)界限模糊，排列紊亂。而APNKO+IR組心肌細(xì)胞核固縮，碎裂，溶解，消失，胞間界限更加模糊，心肌細(xì)胞排列更加紊亂，并出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤。
　　3、Masson染色：與Control組相比較，IR組和APNKO組CVF和PVCA顯著增大，與IR組和APNKO組比較，APNKO+IR組CVF和PVCA顯著增多。
　　4、免疫組化：
　　(1)心肌APN和AdipoR1陽性染色

6、結(jié)果為棕黃色，主要分布為心肌細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)。與Control組比較，IR組小鼠心肌APN和AdipoR1表達(dá)減低。與IR組比較,APNKO組小鼠心肌APN和AdipoR1蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P>0.05)。APNKO+IR組心肌APN和AdipoR1表達(dá)明顯降低,與IR組和APNKO組比較差異顯著；
　　(2)心肌MMP-9陽性染色結(jié)果為棕黃色，主要分布為心肌細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和血管周邊基質(zhì)細(xì)胞。與Control組比較，IR組小鼠

7、心肌MMP-9表達(dá)增加。與IR組比較,APNKO組小鼠心肌MMP-9蛋白表達(dá)水平均顯著增加(P<0.05)。APNKO+IR組心肌MMP-9表達(dá)明顯增加,與IR組和APNKO組比較差異顯著。
　　5、Western Blot:可見各組心肌均表達(dá)MMP-9、APN及其受體1，其中，與Control組相比，IR組和APNKO組心肌MMP-9表達(dá)增加,APN和AdipoR1表達(dá)減少。IR組和APNKO組比較，APNKO+IR組心肌MMP

8、-9表達(dá)顯著增加，APN和AdipoR1表達(dá)顯著減少。
　　6、實(shí)時熒光定量PCR法：與Control組比，IR組心肌APN mRNA表達(dá)明顯降低，與IR組相比，APNKO組心肌APN及AdipoR1的mRNA表達(dá)進(jìn)一步降低，與APNKO組相比，APNKO+IR組APN及AdipoR1的mRNA在心肌組織中表達(dá)明顯降低(P<0.05)。
　　7、Pearson相關(guān)顯示：心肌MMP-9與HOMA-IR呈正相關(guān)(P<0.05)，