津力達(dá)對高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗ApoE基因敲除小鼠脂肪組織中脂代謝的影響.pdf

1、目前糖尿病已成為嚴(yán)重危害我國人民身心健康的慢性疾病。糖尿病的高發(fā)被認(rèn)為與現(xiàn)代人的生產(chǎn)生活方式緊密相關(guān)，不斷高脂肪攝入所帶來的的超重和肥胖已成為了致病的關(guān)鍵因素。有研究證實，脂肪代謝紊亂與糖尿病，尤其是Ⅱ型糖尿病的胰島素抵抗(IR)關(guān)系密切。
　　脂代謝紊亂時過高的FFA水平，使得脂質(zhì)過度沉積于脂肪組織中，從而降低胰島素的敏感性。FFA還可減少脂肪組織中腫瘤壞死因子α(TNF2α)，纖溶酶原激活劑抑制物(PAI-1)，白細(xì)胞介素-6

2、(IL-6)，C-反應(yīng)蛋白等細(xì)胞因子的釋放，降低內(nèi)源性生物活性多肽脂聯(lián)素的分泌，而引起IR。開發(fā)一種既可降糖又有降脂作用的藥物逐漸成為必須。
　　近年來由石家莊以嶺藥業(yè)開發(fā)的降糖類中藥津力達(dá)顆粒在臨床的應(yīng)用得到了廣泛認(rèn)可。已有多項研究證實，津力達(dá)具有明顯的降糖，降脂作用。但目前，該藥的具體作用機(jī)制和靶點(diǎn)尚不清晰。
　　目的:通過高脂飼養(yǎng)ApoE-/-小鼠形成胰島素抵抗并發(fā)脂代謝紊亂的動物模型，從改善胰島素抵抗和脂肪組織代謝的

3、角度探索津力達(dá)改善IR的具體作用機(jī)制。
　　方法:實驗動物與分組:實驗采用48只實驗動物，8只雄性C57BL/6J小鼠設(shè)為正常對照組(NF)，正常飼料喂養(yǎng)。40只雄性ApoE-/-小鼠，給予自制高脂飼料喂養(yǎng)16周后，根據(jù)血糖水平隨機(jī)分為5組:模型組(HF)，羅格列酮組（LGLT，1.33 mg/kg.d-1），津力達(dá)高劑量組（JLDH，3.80 g/kg.d-1），津力達(dá)中劑量組(JLDM，1.90g/kg.d-1)，津力達(dá)低劑量

4、組(JLDL，0.95 g/kg.d-1)。正常對照組，模型組給予純水，每組8只，各組均灌胃給藥。每日一次，連續(xù)8周。
　　取材與指標(biāo)檢測:第8周末次給藥后，禁食不禁水14-16h，進(jìn)行葡萄糖耐量試驗(OGTT)。OGTT實驗結(jié)束后實驗動物回籠正常飼養(yǎng)48h，待小鼠機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)消失后，再次禁食不禁水14-16h，摘除小鼠的眼球取血1.5ml，脫頸椎處死實驗動物，留取胰腺和腹部皮下脂肪組織。將血液離心，分離血清，全自動生化分析儀測定

5、血清中FBG，F(xiàn)FA，TC，TG，HDL-C，LDL-C水平，放射免疫分析法檢測空腹胰島素(Fins)水平。采用10％福爾馬林溶液固定胰腺與部分脂肪組織，HE染色，光鏡觀察組織變化。部分脂肪組織制成勻漿，用于丙二醛(MAD)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量測定，剩余部分脂肪組織，采用蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）測定脂肪組織中過氧化物酶體增殖物激活受體蛋白(PPAR-γ)，胰島素受體底物-1(IRS-1)，胰島素受體底物-2(

6、IRS-2)，葡糖糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體-4(GLUT-4)，固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(SREBP-1c)，LDL受體(LDLR)，F(xiàn)AT蛋白(FAT)及肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1(CPT1)的表達(dá)。
　　結(jié)果:胰島素敏感性評價:和NF組相比，HF組Fins，F(xiàn)BG和HOMA-IR水平均顯著升高（P均＜0.01）。JLD可劑量依賴性地降低Fins和FBG水平，與HF組比較具有統(tǒng)計學(xué)差異（JLDH組P均＜0.01，JLDM組P均＜0.05），與HF組比較，

7、 JLD各組HOMA-IR水平明顯下降具備統(tǒng)計學(xué)差異（JLDH組，JLDM組P均＜0.01，JLDL組P＜0.05）。其中JLDH組對Fins，F(xiàn)BG水平及HOMA-IR的作用和LGLT組相當(dāng)。在給予大量葡萄糖后，各組實驗動物血糖值均在30min升至頂峰，之后逐步下降，JLD各組血糖高峰值與HF組比較明顯降低。
　　改善血清血脂指標(biāo):HF組血清中TC，TG，F(xiàn)FA，LDL-C濃度均較NF組顯著升高（P均＜0.01），而HDL-C濃

8、度低于NF組(P＜0.01)。JLD各劑量組對于血液中的TG有降低作用，與HF組比較差異顯著(P均＜0.05)。JLDH組，JLDM組對于血液中的TC有降低作用，與HF組比較差異顯著（JLDH組P＜0.01，JLDM組P＜0.05），JLD高，中劑量組尚可明顯降低FFA及LDL-C的濃度(JLDH組LDL-C P＜0.01，其他P均＜0.05)，提高HDL-C的濃度（P均＜0.05）。
　　脂肪組織抗氧化指標(biāo):和NF相比，HF組S

9、OD含量降低，MDA含量升高（P均＜0.05）。與HF組相比，JLD各劑量組均可不同程度降低MDA含量（P均＜0.05），JLD高，中劑量組尚可顯著升高SOD的含量(P＜0.05)。
　　脂肪與胰腺組織HE染色:脂肪組織染色后，HF組可見單視野內(nèi)脂肪細(xì)胞數(shù)量降低，體積增大，細(xì)胞長短經(jīng)升高。LGLT組，JLDH組與 NF組相比未見明顯異常，JLDM組，JLDL組則可見不同程度的脂肪細(xì)胞體積增大，及細(xì)胞長短徑的升高。胰腺染色后，HF組

10、胰腺內(nèi)胰島結(jié)構(gòu)不清，細(xì)胞形態(tài)不完整，數(shù)目減少，體積變小，LGLT組和JLD各組和HF組相比均有不同程度的減輕。
　　脂肪組織分子生物學(xué)檢測:Western blot結(jié)果顯示，和NF組相比，HF組FAT及SREBP-1C的表達(dá)上調(diào)，CPT1，GLUT-4，IRS-1，IRS-2及PPARγ的表達(dá)下調(diào)（P均＜0.05），對LDLR未見明顯影響。和HF組相比，JLD三個劑量組均可上調(diào)IRS-2的表達(dá)，JLDM和JLDH組尚可上調(diào)CPT1

11、，IRS-1，IRS-2的表達(dá)及下調(diào)SREBP-1C的表達(dá)，JLDH尚可上調(diào)GLUT-4及PPARγ的的表達(dá)，但LGLT組，JLD各組FAT，LDLR的表達(dá)未見明顯作用，LGLT組均可上調(diào)GLUT-4，IRS-1，IRS-2及下調(diào)SREBP-1C的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1高脂飼料喂養(yǎng)APOE-/-小鼠連續(xù)數(shù)月，可致小鼠出現(xiàn)高血糖，胰島素抵抗和脂質(zhì)代謝紊亂。這應(yīng)該與脂肪組織氧化應(yīng)激過強(qiáng)，糖的利用降低及脂質(zhì)沉積增加有關(guān)。