津力達(dá)對高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)胰島素抵抗ApoE---小鼠肝脂肪酸代謝的影響.pdf

1、隨著社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，國民生活方式的轉(zhuǎn)變，現(xiàn)代人高卡路里攝入及少運(yùn)動消耗的生活方式造成糖尿病、動脈粥樣硬化、代謝綜合癥等疾病的發(fā)病率迅速升高，而這些疾病的中心環(huán)節(jié)均是胰島素抵抗(IR)。因此，如何改善IR并減少上述疾病的發(fā)生成為近來的研究重點。目前改善IR的臨床藥物主要有雙胍類和噻唑烷二酮類藥物(TZD)，但由于其不良反應(yīng)大大的限制了臨床使用，因此，臨床上可供選擇的胰島素增敏藥物較為局限。中醫(yī)藥作為我國的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)，強(qiáng)調(diào)整體、多靶點、系統(tǒng)性

2、調(diào)節(jié)全身內(nèi)分泌代謝活動，大大優(yōu)于西醫(yī)的單一作用。津力達(dá)顆粒含有人參、黃精、茯苓、麥冬、苦參等17味中藥，臨床試驗證實其可有效降糖，改善2型糖尿病患者的IR，但其作用機(jī)制尚未明確。
　　目的:
　　本研究高脂喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠使其形成脂代謝紊亂和高胰島素血癥，成功構(gòu)建環(huán)境和遺傳因素共同作用的與人類發(fā)病方式相近的胰島素抵抗伴脂代謝紊亂的動物模型。肝臟是體內(nèi)碳水化合物、脂類、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換的中心器官，在全身能量代謝中扮演重要角色。

3、肝臟代謝的初期變化與IR、肥胖及2型糖尿病的發(fā)生、發(fā)展有著非常密切的關(guān)系，對肝臟進(jìn)行深入的研究，可為進(jìn)一步探討IR提供重要理論基礎(chǔ)。本研究通過觀察高脂誘導(dǎo)的IR狀態(tài)下的ApoE-/-小鼠的肝臟相關(guān)基因的變化，再進(jìn)行不同劑量的津力達(dá)干預(yù)，以探究津力達(dá)改善IR的作用機(jī)制，期待為臨床改善IR提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　將8只雄性C57BL/6J小鼠設(shè)為正常對照組(NF)，給予正常飼料;健康雄性ApoE-/-小鼠40只，設(shè)為實驗

4、組，給予高脂飼料喂養(yǎng)16周，按照數(shù)字表法隨機(jī)分為5組:模型組（HF）、鹽酸吡格列酮組(BGLT)、津力達(dá)高劑量組(JLDH)、津力達(dá)中劑量組(JLDM)、津力達(dá)低劑量組(JLDL)，按照小鼠體重高劑量組3.8 g/kg.d-1、中劑量組1.9 g/kg.d-1、低劑量組0.95g/kg.d-1給藥，鹽酸吡格列酮片按1.33 mg/kg.d-1給藥，藥物均研細(xì)后用純水混懸并定容至100ml灌胃。見Table1。正常對照組、模型組給予純水灌

5、胃，連續(xù)干預(yù)8周。實驗8周末，進(jìn)行小鼠葡萄糖耐量實驗(OGTT)評價小鼠的胰島素抵抗程度。然后小鼠眼眶取血，留取血清;處死小鼠后，采集肝臟標(biāo)本，液氮中保存?zhèn)溆谩?br>　　測定小鼠血清中空腹血糖(FBG)、游離脂肪酸(FFA)、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。
　　采用放射免疫分析法檢測空腹胰島素(FIns)水平指標(biāo)，計算胰島素敏感指數(shù)(ISI)，用以評價其胰島

6、素抵抗程度。
　　小鼠肝臟HE染色觀察小鼠肝臟組織變化和脂質(zhì)沉積程度。
　　蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)測定小鼠肝臟胰島素受體(INSR)、胰島素受體底物1(IRS-1)、脂肪酸轉(zhuǎn)位酶(FAT)、肉堿酰基轉(zhuǎn)移酶1(CPT1)。
　　結(jié)果:
　　1改善小鼠血液生化指標(biāo)
　　與對照組相比，模型組小鼠的空腹血糖(FBG)、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白膽固醇受體(

7、LDL-C)均有明顯的升高(P＜0.05)，高密度脂蛋白受體(HDL-C)明顯降低(P＜0.05)，說明本實驗制造的高脂飼料誘導(dǎo)的動物模型是成功。
　　與模型組相比，津力達(dá)可以不同程度降低小鼠的空腹血糖(FBG)、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白膽固醇受體(LDL-C)，升高高密度脂蛋白受體(HDL-C)(P＜0.05)，改善小鼠的血液生化指標(biāo)。
　　2提高小鼠的胰島素敏感性
　　與

8、對照組相比，模型組小鼠的空腹胰島素(FIns)和胰島素敏感指數(shù)(ISI)均有明顯的升高(P＜0.05)，說明本實驗制造的高脂飼料誘導(dǎo)的胰島素抵抗動物模型是成功。
　　津力達(dá)各劑量組均可以降低空腹胰島素(FIns)水平，降低胰島素敏感指數(shù)(ISI)?？诜咸烟前胄r后各組小鼠的糖耐量全部出現(xiàn)了血糖水平升至高峰，隨后全部又逐漸降低;模型組與對照組相比，其每個時間點的血糖水平全部都有角明顯的升高;津力達(dá)給藥組與模型組相比時，其各劑量給藥

9、組的小鼠不僅血糖升高峰值均明顯降低，血糖時間的縮短也明顯降低，與模型組相比差異顯著(P＜0.05)。
　　3改善小鼠肝臟脂肪病變
　　利用HE染色發(fā)現(xiàn)津力達(dá)能夠不同程度的減輕高脂誘導(dǎo)小鼠的肝臟脂肪變。
　　4影響小鼠肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)蛋白表達(dá)
　　實驗發(fā)現(xiàn)津力達(dá)各個劑量組能夠不同程度下升高胰島素受體、胰島素受體底物分子的表達(dá)。
　　5影響小鼠肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)酶表達(dá)
　　實驗發(fā)現(xiàn)津力達(dá)各個劑量組能夠不同程