抗體-納米顆粒偶聯(lián)物AntI-HER2-Nab-paclitaxel的構(gòu)建及其對HER2陽性胃癌的抗腫瘤作用及機制研究.pdf

1、目的:本研究旨在探討由抗HER2單克隆抗體(Anti-HER2 monoclonal antibody)和白蛋白紫杉醇(Nab-paclitaxel，Abraxane(@))構(gòu)建的抗體-納米顆粒偶聯(lián)(ANC，Anti-H/Nab-P)治療人表皮生長因子受體2(HER2)陽性胃癌的療效及在HER2陽性胃癌移植瘤模型中的體內(nèi)靶向分布能力，并初步探討其抗腫瘤機制。
　　方法:將抗HER2單克隆抗體和白蛋白紫杉醇通過EDC/NHS行一步法

2、偶聯(lián)，獲得一種新型的抗體-納米顆粒偶聯(lián)物(Anti-H/Nab-P)及納米藥物傳輸系統(tǒng)，并通過透射電鏡(TEM)和動態(tài)光散射(DLS)進(jìn)行檢測Anti-H/Nab-P的形態(tài)及粒徑分布。設(shè)立Anti-H/Nab-P、Nab-paclitaxel、paclitaxel(PTX)及PBS空白對照組作用于HER2陽性的胃癌NCI-N87細(xì)胞。利用CCK-8法檢測不同組別的腫瘤細(xì)胞存活率、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期分布、DAPI染色觀察細(xì)胞

3、核形態(tài)、免疫蛋白印記(Western blot，WB)檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。構(gòu)建NCI-N87裸鼠皮下移植瘤模型，觀察Anti-H/Nab-P、Nab-paclitaxel、paclitaxel(PTX)及PBS空白對照組治療后腫瘤大小變化及裸鼠體重變化情況，并在實驗結(jié)束后處死裸鼠，取各組的重要器官及腫瘤組織進(jìn)行H-E染色觀察。將Nab-paclitaxel和Anti-H/Nab-P與NIR-797P染料進(jìn)行物理吸附，利用小動物活

4、體成像儀實時觀察兩組不同藥物在裸鼠體內(nèi)的分布情況。
　　結(jié)果:TEM結(jié)果顯示Anti-H/Nab-P抗體納米顆粒偶聯(lián)物形態(tài)呈均一球形;DLS結(jié)果表明Anti-H/Nab-P多分散指數(shù)是0.09±0.018(n=3)，平均直徑為(139.18±32.06) nm。PTX組、Nab-paclitaxel組、Anti-H/Nab-P組的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別是(0.24±0.08)μg/ml、(0.13±0.03)μg/ml和(0

5、.048±0.01)μg/ml，提示Anti-H/Nab-P對NCI-N87細(xì)胞殺傷作用具有良好的抗腫瘤作用。與PTX組相比，Nab-paclitaxel組和Anti-H/Nab-P組能顯著誘導(dǎo)G2/M期阻滯;且Anti-H/Nab-P組誘導(dǎo)G2/M期阻滯能力更強。WB顯示，與陰性對照組相比，CLV-caspase-3，CLV-caspase-8，CLV-caspase-9，Survivin和Bax蛋白在PTX組、Nab-paclita

6、xel組和Anti-H/Nab-P組中表達(dá)上調(diào)，而Survivin和Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)，并且在Anti-H/Nab-P組中CLV-caspase和Bax蛋白表達(dá)最強，Survivin和Bcl-2蛋白表達(dá)最弱。體內(nèi)結(jié)果表明，Anti-H/Nab-P組、Nab-paclitaxel組、PTX組、PBS組治療4周后的小鼠腫瘤體積分別為(233±24) mm3、(559±97) mm3、(871±94) mm3和(1576±190) mm3

7、，相對腫瘤體積（RTV）分別為3.72±0.23，8.34±0.51、13.20±1.89、24.28±3.25; Anti-H/Nab-P組腫瘤抑制率達(dá)87.88％±3.45％，抑瘤作用最強，病理學(xué)檢測提示各組之間毒副作用無明顯差異。近紅外活體成像顯示，Anti-H/Nab-P組大量的熒光信號聚集在腫瘤部位，提示Anti-H/Nab-P特異性靶向性能強。
　　結(jié)論:抗體-納米顆粒偶聯(lián)物Anti-H/Nab-P具有主動靶向性、抗腫