中國胃癌her2檢測指南解讀鄭杰

1、概述,本指南推薦IHC與FISH和（或）DSISH相結(jié)合的檢測策略胃癌有必要進(jìn)行準(zhǔn)確的HER2檢測HER2狀態(tài)檢測首先選用免疫組織化學(xué)法（IHC）IHC 3+的病例視為HER2陽性IHC 2+的病例建議進(jìn)一步行原位雜交（ISH：FISH和或DSISH）檢測，IHC 2+/ISH+的病例視為HER2陽性IHC 1+和IHC 0 病例，IHC 2+/ISH - 病例視為HER2陰性胃癌HER2檢測應(yīng)在有能力的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)

2、行檢測質(zhì)量取決于標(biāo)本的采集、處理過程、IHC/ISH 檢測方法和評判標(biāo)準(zhǔn)的執(zhí)行,問題一,1. 請問您所在的醫(yī)院胃癌HER2檢測是否屬于常規(guī)檢測項(xiàng)目？是否不清楚,問題二,請問您所在的醫(yī)院，由誰決定是否做胃癌HER2免疫組化檢測？病理科外科腫瘤內(nèi)科消化內(nèi)鏡室,問題三,請您對多學(xué)科合作對胃癌HER2檢測的重要性打分（0-5重要性逐漸遞增），請按投票器選擇0 12345,胃癌HER2檢測,,,,,,,,,,,,,切

3、片,,,,,,,,,,,脫水包埋,,,,,,固定,,,,,,,HER2檢測的相關(guān)流程,切片,檢測,判讀,標(biāo)本收取,問題四,貴單位胃癌手術(shù)標(biāo)本送到病理科處理的時(shí)間？A 30分鐘內(nèi)B 1小時(shí)內(nèi)C 2小時(shí)內(nèi)D >2小時(shí)E 不清楚,問題五,貴單位手術(shù)標(biāo)本固定時(shí)間？不固定直接取材固定時(shí)間在8小時(shí)內(nèi)固定時(shí)間在12小時(shí)左右（過夜）固定時(shí)間12-24小時(shí)不清楚,標(biāo)本類型,原發(fā)病灶的手術(shù)切除標(biāo)本原發(fā)病灶的胃鏡

4、活檢標(biāo)本建議取6-8塊，以獲得足夠的樣本組織，多點(diǎn)活檢對準(zhǔn)確的檢測有必要切除標(biāo)本離體后20–30分鐘內(nèi)進(jìn)行標(biāo)記、切開、固定等初步處理后，及時(shí)送病理科活檢標(biāo)本的大小≥2x2x2mm3原發(fā)灶活檢組織、手術(shù)切除組織皆有的病例，建議使用手術(shù)切除組織進(jìn)行檢測,標(biāo)本采集,問題六,貴單位送檢標(biāo)本采用何種固定液？不用固定液，直接送病理科10%福爾馬林固定液（蒸餾水配）10%福爾馬林固定液（中性緩沖液配）10%甲醛固定液不清楚,標(biāo)

5、本固定,采用新鮮配制10%中性緩沖福爾馬林作為固定液固定液的量應(yīng)為組織的10倍手術(shù)切除標(biāo)本的固定時(shí)間為8–48h (至少1h/mm組織)活檢標(biāo)本的固定時(shí)間不超過24h (至少1h/mm組織)不宜使用其它固定液，非10%中性緩沖福爾馬林制劑可能會妨礙IHC和ISH檢測的可靠性不宜用微波快速固定組織,規(guī)范的標(biāo)本固定是HER2檢測質(zhì)量的保障；保存良好的組織形態(tài)，防止細(xì)胞內(nèi)蛋白和核酸的丟失,標(biāo)本準(zhǔn)備,固定1小時(shí),固定52小時(shí),固定4小

6、時(shí),固定2周,固定時(shí)間影響HER2染色結(jié)果,固定22小時(shí),圖片由 of A Morey, St Vincent’s Hospital, NSW, Australia提供,固定較差示例：乳腺癌HER2 IHC檢測,固定較差會導(dǎo)致染色結(jié)果的異質(zhì)性胞質(zhì)染色可能是由固定較差導(dǎo)致,圖片由 W Hanna提供,固定較差示例：胃癌HER2 IHC檢測,固定不完全會導(dǎo)致假陽性檢查結(jié)果胞質(zhì)染色可能由于使用了不恰當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞?圖片

7、由Targos Molecular Pathology.提供,固定較差示例：HER2 ISH檢測,圖片由 Abbott/Vysis.提供,固定不完全 - SISH，“空核”,固定不完全導(dǎo)致探針信號較弱或缺失,過度染色會導(dǎo)致持續(xù)性自發(fā)熒光 探針信號可能較弱或缺失,HER2檢測,HER2過表達(dá)的檢測,HER2擴(kuò)增的檢測,,,免疫組織化學(xué)染色方法（IHC） 自動(dòng)化,原位雜交方法 （ISH） FISH Dual SISH,實(shí)驗(yàn)室總體要求

8、,應(yīng)當(dāng)在有條件的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，擁有試驗(yàn)所需的儀器和設(shè)備及空間條件實(shí)驗(yàn)室掌握包括標(biāo)本的制備、抗體的選擇、抗原修復(fù)方法及其它相關(guān)技術(shù)；探針的選擇、檢測預(yù)處理方法及其它相關(guān)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過嚴(yán)格的內(nèi)部和外部質(zhì)量控制程序驗(yàn)證，建立完善的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作流程（SOP） 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)員具備相關(guān)資質(zhì)及經(jīng)過合格培訓(xùn),HER2檢測-IHC,IHC方法 試驗(yàn)方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件可以選擇手工染 色、半自動(dòng)染色和全自動(dòng)免疫組化染色 建議使用全自動(dòng)染

9、色方法,建議使用我國相關(guān)部門（SFDA）批準(zhǔn)的試劑盒 自行組配和分裝的抗體必須經(jīng)過嚴(yán)格的內(nèi)部和外部質(zhì) 量控制程序驗(yàn)證，并與權(quán)威機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的檢測試劑盒進(jìn) 行比對，以保證檢測結(jié)果的可靠性,IHC抗體,結(jié)果判讀和分析,普通光學(xué)顯微鏡,熒光顯微鏡,病理醫(yī)生需要經(jīng)過培訓(xùn) IHC評分標(biāo)準(zhǔn)和乳腺癌有所不同 樣本：活檢組織和切除組織有所不同 觀察：高異質(zhì)性需要全面觀察所有腫瘤組織 溝通：結(jié)果不確定時(shí)需要與腫瘤科醫(yī)生溝通,

10、IHC判讀標(biāo)準(zhǔn)（參照ToGA經(jīng)驗(yàn)，所有圖片來自SCC）,0 無反應(yīng)或腫瘤細(xì)胞膜染色<10%,1+ ≥10%腫瘤細(xì)胞微弱或隱約膜染色，細(xì)胞膜僅部分區(qū)域著色,2+ ≥10%腫瘤細(xì)胞弱到中度的完全或細(xì)胞基底部和兩側(cè)邊膜染色,3+ ≥10%腫瘤細(xì)胞完全性或基底部和兩側(cè)邊膜強(qiáng)染色（對3+的病例同時(shí)表明百分率，注明是否有異質(zhì)性）,IHC結(jié)果判讀時(shí)應(yīng)注意：細(xì)胞質(zhì)著色應(yīng)忽略不計(jì)，正常胃黏膜上皮細(xì)胞不應(yīng)著色,,HER2檢測-IHC,原位

11、雜交檢測方法（ISH） 熒光原位雜交（FISH ） 雙色銀染原位雜交（Dual SISH， DSISH）探針建議使用我國相關(guān)部門（SFDA）批準(zhǔn)的試劑盒,FISH，HER2紅色信號增多，局部呈簇狀，CEP17信號1-2個(gè)，比值7.2，有擴(kuò)增（100×）,FISH，HER2和CEP17信號各1-2個(gè)，比值1.65，無擴(kuò)增（100×）,FISH：嚴(yán)格按照試劑盒標(biāo)準(zhǔn)程序執(zhí)行,HER2檢測-FISH,圖片

12、來自SCC,DSISH HER2黑色信號擴(kuò)增，呈簇狀；CEP17紅色信號1-2個(gè)；比值15，有擴(kuò)增(100×),DSISH HER2和CEP17信號各1-2個(gè)，比值<0.8，無擴(kuò)增(100×),DSISH：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)先進(jìn)行嚴(yán)格的對比試驗(yàn)和程序優(yōu)化 嚴(yán)格按照所用全自動(dòng)染色儀器的優(yōu)化程序和SOP執(zhí)行,HER2檢測-DSISH,圖片來自SCC,請問貴院是否有統(tǒng)一的HER2檢測病理報(bào)告格式？

13、是否,問題七,檢測報(bào)告內(nèi)容,胃癌HER2 IHC/ISH檢測報(bào)告臨床信息： 姓名 性別 年齡 門診／住院號 送檢醫(yī)師聯(lián)系方式 檢測日期 年 月 日標(biāo)本信息： 病理號/蠟塊號 標(biāo)本類型： 手術(shù)切除□ 活檢□腫瘤部位： 胃食道交界處□ 胃底□ 胃

14、體□ 胃竇□ 幽門管□ 轉(zhuǎn)移灶□標(biāo)本固定液種類（10％中性緩沖福爾馬林）是□否□標(biāo)本離體至固定時(shí)間(如有記錄) 分鐘標(biāo)本固定的時(shí)間(如有記錄) 分鐘組織學(xué)類型/分級 Laurén分型 臨床分期 T N M,HER2 IHC 檢測報(bào)告,檢測信息：抗體信息(克隆號／生產(chǎn)商) 檢測方法 手工/半自動(dòng) □全自動(dòng) □

15、對照設(shè)置情況 3+ □ 0 □樣本量是否足夠用于評估是□否□具有膜著色的腫瘤細(xì)胞的百分比 %著色的異質(zhì)性有□無□腫瘤細(xì)胞膜染色模式 完整□ 基底和側(cè)膜（U-shaped)□ 兩者皆有□判讀結(jié)果：0 □ l+ □ 2+ □ 3+ □ 無法判讀□結(jié)論：陽性□；不確定□；陰性□；無法判讀□檢測人員：技術(shù)員

16、 病理醫(yī)師,HER2 ISH 檢測報(bào)告,檢測信息：探針信息(生產(chǎn)商/商品號) 檢測方法 對照設(shè)置情況 陽性對照□ 陰性對照□ 樣本量是否足夠用于評估是□否□IHC檢測結(jié)果0 □ l+ □ 2+ □3+ □無法判讀□判

17、讀結(jié)果： 用于評估的腫瘤細(xì)胞數(shù)量 HER2信號總數(shù)／CEPl7信號總數(shù) HER2信號數(shù)平均值／細(xì)胞核 CEPl7信號數(shù)平均值／細(xì)胞核 17號染色體是否為多體是□否□結(jié)論： 陽性(擴(kuò)增) □ 陰性(無擴(kuò)增) □ 無法判讀 □檢測人員：技術(shù)員

18、 病理醫(yī)生,實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制 （1）,HER2蛋白和基因擴(kuò)增的檢測均應(yīng)在內(nèi)、外部質(zhì)量控制良好的病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測必須嚴(yán)格按照指南要求執(zhí)行，以保證結(jié)果可靠不具備HER2檢測條件的單位應(yīng)按照指南要求，妥善處理和準(zhǔn)備好標(biāo)本，提供給有質(zhì)量保證的病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測,實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制 （2）,實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、外部質(zhì)量控制和SOP的主要要求如下準(zhǔn)備開展GC HER2檢測的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇1～2家已較好開展該項(xiàng)檢測的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行25～100例標(biāo)本的對比驗(yàn)證或通過

19、參加有關(guān)外部質(zhì)量控制活動(dòng)來實(shí)現(xiàn)，外部質(zhì)控陽性和陰性結(jié)果的一致性應(yīng)達(dá)到90％以上，每年應(yīng)進(jìn)行1～2次從事GC HER2檢測的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員和病理醫(yī)師應(yīng)進(jìn)行必要的培訓(xùn)和資格考核,實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制 （3）,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立完善的SOP，并做好每次檢測情況的記錄和存檔工作任何改變操作程序和試劑的行為均應(yīng)重新進(jìn)行嚴(yán)格的驗(yàn)證內(nèi)部質(zhì)控應(yīng)包括同一組織不同批次染色結(jié)果的重復(fù)性分析，每次染色陽性、陰性對照的設(shè)置，如有可能還應(yīng)沒置包括低表達(dá)／低擴(kuò)增對照檢測

20、相關(guān)的儀器和設(shè)備需定期維護(hù)、校驗(yàn),,類似乳腺癌亮視野檢測方法有優(yōu)勢,Her2檢測流程,樣本收集,鏡下觀察,異質(zhì)性高需要觀察整張切片,,檢測所需時(shí)間,胃癌進(jìn)展快，宜及時(shí)獲得結(jié)果多學(xué)科參與,結(jié)果判讀,與乳腺癌有所不同,,,胃癌HER2檢測： 基本過程和特殊性,數(shù)量、質(zhì)量合適的含有腫瘤組織的活檢標(biāo)本 具有代表性的手術(shù)切除標(biāo)本,多學(xué)科協(xié)作共同努力 醫(yī)生和技術(shù)員知識更新和觀念改變 患者和醫(yī)生,多學(xué)科協(xié)作檢測HER2：臨床醫(yī)生之角

21、色,采樣 手術(shù)和胃鏡活檢（6-8塊組織） 固定 10%中性緩沖福爾馬林樣本送檢（離體時(shí)間）30分鐘結(jié)果解讀 HER2 + IHC 0 1+ 2+ 3+ HER2 陽性,多學(xué)科協(xié)作檢測HER2：病理醫(yī)生之角色,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118–145.,檢測

22、結(jié)果分析檢查備檢標(biāo)本是否可用正確設(shè)立內(nèi)部對照組依照國際評分系統(tǒng)進(jìn)行評分檢測結(jié)果報(bào)告使用標(biāo)準(zhǔn)化HER2檢測結(jié)果報(bào)告表報(bào)告內(nèi)容應(yīng)包括標(biāo)本取樣，固定，檢測方法及評分系統(tǒng)多學(xué)科檢測治療小組(MDT)會議,學(xué)科協(xié)作檢測HER2：技術(shù)員之角色,處理: 避免影響檢測結(jié)果之因素-- 最佳固定時(shí)間及固定方法-- 石蠟包埋-- 組織切片的合理時(shí)間 (最好于HER2檢測前切片)-- 標(biāo)本脫蠟方法: 使用標(biāo)準(zhǔn)化/經(jīng)驗(yàn)證之檢測步驟