P物質(zhì)快速激活經(jīng)典Wnt通路調(diào)控MC3T3-E1細(xì)胞凋亡.pdf

1、創(chuàng)傷、感染等多種原因造成的骨折延遲愈合及骨折不愈合一直是嚴(yán)重影響患者臨床預(yù)后及生存質(zhì)量的醫(yī)學(xué)難題。一方面，骨組織工程及外固定架等技術(shù)的快速發(fā)展，極大地改善了此類患者的預(yù)后;另一方面，對骨折再生與重建過程中多種因素調(diào)控機制的深入研究，不僅全面闡釋了骨再生過程中的復(fù)雜病理生理學(xué)機制，更為臨床治療該類疾患提供了全新的思路和堅實的理論基礎(chǔ)。
　　近年來，大量研究已證實:神經(jīng)因素對骨折愈合、骨組織再生修復(fù)具有確切的生物調(diào)控作用。其中，以降鈣

2、素基因相關(guān)肽(Calcitonin gene-related peptide，CGRP)和P物質(zhì)(Substance P，SP)為代表的神經(jīng)肽類物質(zhì)是神經(jīng)因素發(fā)揮調(diào)控作用的關(guān)鍵因素。本課題通過檢測P物質(zhì)對小鼠MC3T3-E1成骨細(xì)胞去血清誘導(dǎo)凋亡的影響，以闡明P物質(zhì)在去血清誘導(dǎo)凋亡過程中的生物學(xué)效應(yīng)，并進(jìn)一步探討P物質(zhì)激活經(jīng)典wnt信號通路發(fā)揮調(diào)控作用的機制。
　　目的:
　　(1)培養(yǎng)小鼠MC3T3-E1成骨細(xì)胞，檢測去血

3、清誘導(dǎo)凋亡中NK-1受體表達(dá)的變化;
　　(2)探討去血清凋亡對小鼠MC3T3-E1成骨細(xì)胞經(jīng)典wnt信號通路的影響;
　　(3)探討P物質(zhì)在小鼠MC3T3-E1成骨細(xì)胞去血清誘導(dǎo)凋亡過程中的生物學(xué)效應(yīng);
　　(4)探討去血清誘導(dǎo)凋亡過程中，P物質(zhì)通過經(jīng)典Wnt信號通路調(diào)控小鼠MC3T3-E1成骨細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的作用機制。
　　方法:
　　小鼠MC3T3-E1成骨細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)、小鼠MC3T3-E1成骨細(xì)胞

4、的化學(xué)染色鑒定、PCR檢測目的基因表達(dá)、Western Blot檢測目的蛋白表達(dá)、免疫熒光標(biāo)記相關(guān)抗體-FITC染色等。實驗設(shè)計分組:對照組、P物質(zhì)組、P物質(zhì)+NK-1受體拮抗劑組、P物質(zhì)+Wnt通路拮抗劑DKK組。
　　結(jié)果:
　　(1)本實驗所采用的小鼠MC3T3-E1細(xì)胞具有成骨特性并可以穩(wěn)定表達(dá)NK-1受體，成骨類細(xì)胞持續(xù)表達(dá)NK-1受體是神經(jīng)肽類物質(zhì)發(fā)揮調(diào)控作用的基礎(chǔ);
　　(2)去血清處理可以誘導(dǎo)小鼠MC3

5、T3-E1細(xì)胞發(fā)生凋亡改變。去血清處理誘導(dǎo)MC3T3-E1細(xì)胞凋亡的同時激活經(jīng)經(jīng)典Wnt信號通路。
　　(3)P物質(zhì)抑制小鼠MC3T3-E1細(xì)胞去血清誘導(dǎo)凋亡過程中Bax/Bcl-2和凋亡蛋白3等凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，P物質(zhì)具有明顯的抗凋亡作用;
　　(4)P物質(zhì)可快速激活小鼠MC3T3-E1細(xì)胞去血清誘導(dǎo)凋亡過程中β-cantenin的表達(dá)，并促進(jìn)該蛋白進(jìn)入細(xì)胞核，其速率明顯快于去血清誘導(dǎo)凋亡的速率。
　　結(jié)論: