TRIM65在MDA-5抗病毒信號活化過程中的關鍵作用及其機制探究.pdf

1、天然免疫抗病毒信號活化是機體免疫系統(tǒng)抵抗外界病毒感染的第一道防線，而RIG-Ⅰ樣模式識別受體所調控的抗病毒信號活化是天然免疫抗病毒系統(tǒng)中非常重要的一個組成部分。RIG-Ⅰ樣模式識別受體能夠特異性地感知RNA病毒的入侵，活化下游信號通路，誘導Ⅰ型干擾素及其他細胞因子的產生，誘發(fā)機體對病毒實施有效的抵抗。RIG-Ⅰ樣模式識別受體家族主要有三個成員，分別是RIG-Ⅰ、MDA-5以及LGP2。其中RIG-Ⅰ和MDA-5分別能夠特異性地識別不同種

2、類的RNA病毒，而LGP2主要是針對RIG-Ⅰ和MDA-5的活化過程起到調控作用。RIG-Ⅰ或MDA-5功能的缺失會使得機體不能夠有效抵抗RNA病毒的感染，導致機體出現多種病癥甚至死亡。而二者功能的過度活化同樣會導致機體穩(wěn)態(tài)的失衡，出現一系列自身免疫性疾病，如紅斑狼瘡?？梢奟IG-Ⅰ和MDA-5功能的正常發(fā)揮對于機體抵抗RNA病毒以及穩(wěn)態(tài)的維持是不可或缺的。目前，對于RIG-Ⅰ信號活化機制的探究相對較為清楚，但是對于MDA-5是如何被活

3、化的目前的研究還知之甚少。目前已知MDA-5與RIG-Ⅰ相似也會被PP1介導發(fā)生磷酸化修飾，而其他修飾類型是否在其中也起著重要的作用目前仍是未知的。尤其是在RIG-Ⅰ的活化過程中起著關鍵作用的泛素化修飾，是否在MDA-5活化過程中也起著至關重要的作用，以及有哪些泛素連接酶參與到其中目前還不清楚?；谝陨显颍疚囊郧叭说难芯繛榛A，針對RNA活化MDA-5的分子機制展開了一系列探討。
　　在本文的研究中，我們利用免疫共沉淀及質譜分

4、析的方法篩選到與MDA-5可能存在相互作用的蛋白。在眾多篩選到的蛋白中，我們發(fā)現，一種E3泛素連接酶—TRIM65，與MDA-5存在著非常強的相互作用。后續(xù)的一系列實驗也證實了這一相互作用的存在。為了探究二者的相互作用對于MDA-5信號活化的作用，我們構建了Trim65缺陷小鼠，并利用MDA-5信號特異性活化劑處理缺陷鼠以及缺陷鼠來源的細胞。結果發(fā)現，TRIM65表達缺失后，MDA-5抗病毒信號通路的活化受到了極大程度的抑制。在人源細胞

5、中我們也得到了類似的結果。機制方面，我們發(fā)現TRIM65能夠利用其自身的E3泛素連接酶的活性誘導MDA-5的743位賴氨酸發(fā)生K63連接方式的泛素化。進一步我們利用SDD-AGE以及激光共聚焦技術，發(fā)現了TRIM65對MDA-5泛素化的誘導能夠顯著促進MDA-5寡聚體的形成，而MDA-5寡聚體的形成是MDA-5抗病毒信號活化的關鍵步驟。
　　通過以上研究，我們不僅發(fā)現了TRIM65是MDA-5信號活化過程中的一個關鍵組分，同時還證