Sigma-1R對缺血性腦卒中周細胞功能的調節(jié)及機制研究.pdf

1、目的:
　　闡明sigma-1R對缺血性腦卒中周細胞功能的調節(jié)作用及機制研究，為sigma-1R作為缺血性腦卒中潛在治療靶點提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　應用6-8周齡C57BL/6J和sigma-1R KO雄性小鼠，用光栓法制備永久性大腦中動脈栓塞(permanent middle cerebral artery occlusion，pMCAO)模型。pMCAO模型24 h后應用核磁共振成像(magnetic re

2、sonance imaging，MRI)和2，3，5-氯化三苯基四氮唑（2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色測定腦梗死體積;神經功能學評分測定神經功能損傷水平;伊文斯蘭滲漏實驗測定血腦屏障完整性;電鏡和免疫熒光染色觀察血管的完整性;Western Blot檢測缺血核心區(qū)緊密連接蛋白、周細胞標記分子、凋亡蛋白及自噬蛋白表達;采用氧糖剝奪(oxygenglucose deprivation，O

3、GD)模型處理周細胞細胞系C3H/10T1/2(C3H)細胞和小鼠原代周細胞0h、1h、3h、6h、12 h、24 h后，應用噻唑藍(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT）法檢測周細胞細胞活力，應用Western Blot檢測周細胞標記分子、凋亡蛋白及自噬蛋白表達。應用自噬阻斷劑3-MA及自噬誘導劑雷帕霉素處理周細胞，觀察自噬對OGD所

4、致周細胞凋亡的影響;應用sigma-1R激動劑PRE084及阻斷劑BD1047處理周細胞，觀察sigma-1R對OGD所致周細胞凋亡的影響，以及sigma-1R與自噬的關系。應用MTT法考察新型sigma-1R高親和力化合物對OGD所致原代周細胞和原代神經元細胞活力的影響，同時在pMCAO和短暫性大腦中動脈栓塞(transient middle cerebral artery occlusion，tMCAO)腦卒中小鼠模型上通過TTC，

5、MRI，伊文斯蘭滲漏實驗和Western Blot等手段進行藥效驗證。
　　結果:
　　整體水平結果表明，敲除sigma-1R加重pMCAO模型小鼠腦缺血損傷，增加腦梗死體積和神經功能障礙;加重pMCAO模型小鼠血腦屏障破壞;促進pMCAO模型小鼠缺血核心區(qū)細胞的凋亡和自噬;離體水平進一步驗證，OGD處理C3H細胞和原代周細胞呈時間依賴性地引起細胞凋亡和自噬;進一步研究抑制自噬能夠減少OGD引起C3H細胞和原代周細胞的凋亡，

6、而激活自噬能夠促進細胞凋亡;激活sigma-1R能夠減少OGD所致C3H細胞和原代周細胞的凋亡，而阻斷sigma-1R能促進周細胞的凋亡;激活sigma-1R能減少OGD所致C3H細胞和原代周細胞的自噬，而阻斷sigma-1R能增加C3H細胞和原代周細胞的自噬。在上述研究基礎上，我們自主合成系列sigma-1R激動劑，其中化合物M1能夠有效減少pMCAO模型小鼠和tMCAO模型小鼠的腦缺血損傷。
　　結論:
　　本研究發(fā)現(xiàn)激