基于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與Wnt-β-catenin信號通路研究蛇床子素對成骨細胞增殖與分化的影響及機制.pdf

1、背景:骨質(zhì)疏松癥是由體內(nèi)骨吸收-骨形成耦聯(lián)失衡引起的代謝性骨病，其治療著眼于恢復(fù)骨代謝平衡。蛇床子素被證實具有抗骨質(zhì)疏松的藥理作用，但其抗骨質(zhì)疏松的機制尚不清楚。
　　目的:觀察蛇床子素對大鼠成骨細胞增殖與分化的影響，探討蛇床子素抗骨質(zhì)疏松的機制。
　　方法:通過改良酶消化法及反復(fù)貼壁純化法從新生大鼠顱骨中獲取原代成骨細胞;通過光鏡下形態(tài)觀察、堿性磷酸酶染色、茜素紅法礦化結(jié)節(jié)染色等方式鑒定成骨細胞。采用CCK-8法篩選出10

2、-6M、10-5M、10-4M作為低、中、高濃度蛇床子素組，以10-8Mβ-雌二醇作為陽性對照組，0.25％DMSO作為溶劑對照組，最后設(shè)立空白組排除DMSO對成骨細胞的干擾。本研究采用CCK-8法測定成骨細胞增殖能力、偶氮偶聯(lián)法測定細胞內(nèi)堿性磷酸酶表達、茜素紅染色法測定成骨細胞礦化能力以及酶聯(lián)免疫法測定骨鈣素分泌量，從不同角度、不同階段檢測蛇床子素對成骨細胞分化的影響。并通過檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標志分子GRP78、PDI、CHOP以及Wnt

3、/β-catenin信號通路的Wnt、β-catenin蛋白的表達來分析蛇床子素影響成骨細胞增殖和分化的機制。
　　結(jié)果:10-4M的蛇床子素可以抑制成骨細胞增殖，10-5M的蛇床子素在給藥72h后也會抑制成骨細胞增殖;10-4M的蛇床子素可以促進成骨細胞表達，10-5M蛇床子素組在給藥48h后成骨細胞內(nèi)堿性磷酸酶也開始提高;各濃度蛇床子素均可以促進成骨細胞骨鈣素的分泌和礦化結(jié)節(jié)形成，其中10-4M的蛇床子素效果最強;各濃度蛇床素

4、均可以降低GRP78表達，尤以10-4M濃度最為顯著，而PDI的表達與蛇床子素的濃度呈正相關(guān)，其中10-4M濃度蛇床子素可以增加PDI表達，CHOP的表達只在10-4M濃度組檢測到;Wnt1蛋白在10-4M及10-5M組表達增加，而β-catenin只有10-4M組升高。
　　結(jié)論:蛇床子素可通過提高Wnt1蛋白水平來促進β-catenin介導(dǎo)的成骨細胞增殖與分化，但是高濃度蛇床子素過強的促分化能力會通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑造成成骨細胞