地鱉蟲纖溶活性先導蛋白抗腫瘤細胞作用研究.pdf

1、本實驗以傳統(tǒng)中藥材雌性地鱉蟲(Eupolyphaga sinensis Walker)為原料，采用浸提、鹽析和DEAE-52纖維素離子層析等純化方法，從其體內分離純化得到纖溶活性蛋白(Fibrinolyric Protein of Eupolyphaga sinensis Walker，EFP)，采用SDS-PAGE電泳法對其進行了分子量和純度測定，SDS-PAGE結果顯示其中有三種蛋白亞基，分子量為別為74．9KD，71．5KD，65

2、．2KD，采用考馬斯亮藍法測得其中的蛋白含量為17．2％；采用纖維蛋白平板法測定EFP纖溶活性，測得其纖溶活性為20U/mg。
　　 通過體內實驗，構建荷瘤小鼠模型，藥物實驗分為陽性對照組(環(huán)磷酰胺)，陰性對照組(生理鹽水)，藥物高濃度組、中濃度組和低濃度組。實體瘤通過瘤重計算抑瘤率，腹水瘤通過細胞濃度計算抑瘤率。結果顯示EFP對S180腹水瘤有較好的抑制率，藥劑量為2．90mg/kg的抑制率為69．56％，明顯高于環(huán)磷酰胺(2

3、0mg/kg)的51．75％的抑制率。EFP對S180實體瘤有較好抑制作用，藥劑濃度為1．45g/kg時，抑制率為37．48％，高于環(huán)磷酰胺(20mg/kg)的35．59％的抑制率。并呈現(xiàn)一定的藥物劑量依賴性。EFP對H22腹水瘤有較好的抑制率，藥劑量為2．90mg/kg的抑制率為56．0％，和環(huán)磷酰胺(20mg/kg)的56．02％的抑制率相當。藥劑濃度為0．73mg/kg時，對H22實體瘤抑瘤率為41％，高于環(huán)磷酰胺(20mg/kg

4、)的37％的抑制率。通過VEGF含量檢測可以看到，在S180荷瘤小鼠實驗中，生理鹽水組的荷瘤小鼠血清中VEGF含量為140．0 pg/ml，而藥物組高濃度組荷瘤小鼠的VEGF含量僅為92．4 pg/ml。在H22荷瘤小鼠實驗中，生理鹽水組的荷瘤小鼠血清中VEGF含量為91．1 pg/ml，而藥物組高濃度組荷瘤小鼠的VEGF含量僅為57．8 pg/ml，從上面的實驗可以看到小鼠給藥量和VEGF含量呈負相關。端粒酶活性的檢測也可以看到，相對

5、與生理鹽水組，藥物組的端粒酶活性都有所降低。
　　 通過體外實驗，不同濃度的EFP含藥血清和EFP分別作用于H22，HeDG-2，MCF-7細胞株，于48h采用MTT法檢測各組血清和EFP對腫瘤細胞株增殖的抑制率。結果表明，EFP含藥血清組對H22，HepG-2，MCF-7細胞的增殖均有抑制作用，抑制作用呈一定的量效和時效關系，即隨著含藥血清濃度的增加，抑制率逐漸增加；而各組EFP對H22，HepG-2細胞的增殖則沒有抑制作用，