miR-a和miR-503在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、食管癌是惡性程度最高的癌種之一，其死亡率占世界癌癥相關(guān)死亡率的第六位。其中，中國的食管癌患者數(shù)量居世界首位。根據(jù)病理學(xué)分類，可將食管癌分為兩種亞型，即食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)和食管腺癌(EAC)，而中國的食管癌患者絕大部分是食管鱗狀細(xì)胞癌(＞90％)。目前，食管鱗狀細(xì)胞癌的臨床治療手段很有限，中國食管癌患者的五年生存率低于20％。因此，進(jìn)一步探究食管鱗癌的發(fā)病機(jī)理、篩選食管鱗癌診斷的分子標(biāo)志物、尋找有效的藥物靶點(diǎn)具有重要的臨床意義。<

2、br>　　microRNA是一類長度約18～25nt的小分子單鏈非編碼RNA，是由具有約70～90nt發(fā)夾結(jié)構(gòu)的單鏈RNA前體經(jīng)過Dicer酶加工生成。microRNA主要通過其seed region與靶基因mRNA的3'UTR堿基互補(bǔ)配對，導(dǎo)致靶基因mRNA的翻譯抑制或降解，從而對靶基因在轉(zhuǎn)錄后水平進(jìn)行調(diào)控。越來越多的研究結(jié)果表明，microRNA在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、惡性轉(zhuǎn)化及腫瘤轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮重要作用。
　　本文的第一

3、部分，對91例食管鱗癌及癌旁樣本進(jìn)行小RNA測序、分析并驗(yàn)證測序結(jié)果，發(fā)現(xiàn)miR-a在食管癌組織中的表達(dá)量明顯高于癌旁。利用細(xì)胞模型和裸鼠模型研究miR-a在食管癌中的功能，發(fā)現(xiàn)miR-a可促進(jìn)食管癌細(xì)胞的侵襲和遷移，且高表達(dá)miR-a食管癌細(xì)胞可促進(jìn)裸鼠的肺轉(zhuǎn)移。mRNA芯片分析、數(shù)據(jù)庫預(yù)測結(jié)合熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)SMAD7是miR-a的靶基因。在食管癌細(xì)胞中敲降SMAD7，可模擬miR-a對食管癌細(xì)胞侵襲、遷移的促進(jìn)作用，在過表

4、達(dá)miR-a的食管癌細(xì)胞中同時(shí)過表達(dá)SMAD7可部分回復(fù)miR-a對食管癌細(xì)胞侵襲、遷移的促進(jìn)作用;在食管癌細(xì)胞中，敲降SMAD7的表達(dá)可促進(jìn)SMAD2/3入核，而過表達(dá)miR-a也可促進(jìn)SMAD2/3入核;以上結(jié)果說明miR-a通過靶向SMAD7促進(jìn)SMAD2/3入核從而促進(jìn)細(xì)胞的侵襲遷移。在血漿中檢測miR-a的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)miR-a在食管癌患者血漿中的表達(dá)明顯高于在健康人血漿中的表達(dá)，這提示miR-a可能作為食管鱗癌的一個新的診

5、斷標(biāo)志物。
　　本文第二部分，通過qPCR檢測71例食管鱗癌樣本中miR-503的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)miR-503在食管癌組織中的表達(dá)明顯低于配對的癌旁組織。細(xì)胞功能研究發(fā)現(xiàn)，miR-503可抑制食管癌細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移及并導(dǎo)致細(xì)胞周期G1/S期的阻滯。數(shù)據(jù)庫預(yù)測、Western blot、結(jié)合熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)表明CyclinD1是miR-503的靶基因。過表達(dá)miR-503可以抑制CyclinD1 mRNA和蛋白水平的表達(dá)?；貜?fù)