玉葉金花化學(xué)成分及其體外抗流感病毒抗炎活性研究.pdf

1、目的:
　　中藥玉葉金花，又名山甘草，為茜草科(Rubiaceae)玉葉金花屬(Mussaenda L.)，玉葉金花(Mussaenda pubescens Ait.f.)的干燥莖葉。據(jù)研究顯示玉葉金花(Mussaenda pubescens Ait.f)中含豆甾醇，環(huán)烯萜類，三萜類等化學(xué)成分。玉葉金花性涼，味甘、淡，歸膀胱、肺及大腸經(jīng)，為解表藥、利濕藥。具有清熱利濕、解表消腫、清涼消暑、活血化瘀等功效，可用于治療感冒、發(fā)熱、濕熱

2、小便不利、毒蛇咬傷、治腸胃疾病及預(yù)防流感等。玉葉金花在近些年因抗炎抗抗流感功效明顯而被廣泛研究，實(shí)驗(yàn)證實(shí)玉葉金花水提物具有抗炎抗病毒的功效，其含有的成分玉葉金花苷酸甲酯(mussaenoside)是環(huán)烯醚萜苷，具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛及抗菌作用。本實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)證明玉葉金花水煎液對(duì)小鼠流感模型血清中的IL-6、TNF-α等具有下調(diào)作用。
　　流感病毒(Influenza Virus，IV)屬于正粘病毒科(Orthomyxovirida

3、e)流感病毒屬(Influenzavirus)，甲型流感病毒根據(jù)囊膜上的血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)結(jié)構(gòu)和基因特性的不同，可以分為16個(gè)HA亞型和9個(gè)NA亞型。甲型流感病毒是一種多形性的囊膜病毒，呈球形，病毒顆粒結(jié)構(gòu)可分為囊膜，質(zhì)蛋白和核殼體三層，外層囊膜由一個(gè)含有三種跨膜蛋白(HA、NA、M2)的脂質(zhì)雙分子層構(gòu)成。其中，HA是含量最豐富的囊膜蛋白，占80％，病毒吸附和膜融合中發(fā)揮著重要的作用。當(dāng)流感病毒入侵機(jī)體時(shí)，機(jī)體在產(chǎn)生致炎

4、細(xì)胞因子以消滅病原微生物的同時(shí)，為了防止炎癥過度反映，機(jī)體便產(chǎn)生內(nèi)源性的抗炎細(xì)胞因子。其中促炎性細(xì)胞因子主要包括IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α等。基于以上研究，本課題主要對(duì)玉葉金花的化學(xué)成分進(jìn)行研究，并對(duì)其體外抗流感病毒抗炎的活性進(jìn)行探討。
　　方法:
　　采用硅膠、sephadex LH-20、ODS柱色譜等方法分離純化化合物，通過核磁共振技術(shù)以及文獻(xiàn)比對(duì)鑒定其結(jié)構(gòu)，從玉葉金花中分離并鑒定

5、出6種單體化合物，其中五個(gè)化合物通過甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株A/FM1/47(H1N1)感染的MDCK體外流感模型進(jìn)行抗病毒活性檢測(cè)，并通過CPE法和MTT法評(píng)價(jià)結(jié)果;采用qPCR法檢測(cè)病毒HA基因水平的相對(duì)含量，來(lái)評(píng)價(jià)化合物是否對(duì)病毒HA基因表達(dá)有調(diào)節(jié)作用。在脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞THP-1的炎癥模型，進(jìn)行抗炎活性評(píng)價(jià)。本實(shí)驗(yàn)采用CCK-8法測(cè)定THP-1細(xì)胞活性及各單體化合物的TC50;熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Realt

6、ime-PCR)法測(cè)定炎癥因子TNF-α，IL-12，IL-8，IL-23.IL-22，IL-1β的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　從玉葉金花中分離并鑒定了6個(gè)化學(xué)成分，分別為:咖啡酸甲酯(1)、豆甾醇(2)、mussaendoside R(3)、 mussaendoside Q(4)、 mussaendoside G(5)、mussaendoside U(6)。選擇其中化合物1、3、4、5和6在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞TH

7、P-1上進(jìn)行抗炎活性研究結(jié)果顯示，在體外實(shí)驗(yàn)中均可對(duì)細(xì)胞因子IL-1β、IL-23、TNF-α、IL-12、IL-22、IL-8的mRNA相對(duì)含量有一定調(diào)節(jié)能力，其中，化合物1和3的調(diào)節(jié)作用顯著。化合物1，3和4具有體外抗病毒活性，且對(duì)病毒HA mRNA的相對(duì)含量有下調(diào)作用。
　　結(jié)論:
　　化合物1是首次從該植物中發(fā)現(xiàn)?；衔?，3和4具有體外抗流感病毒活性，其機(jī)理與它可以下調(diào)病毒HA mRNA相對(duì)表達(dá)水平有相關(guān)性。在LP