麻葉蕁麻葉化學(xué)成分、多糖含量測定及抗炎活性的研究.pdf

1、蕁麻屬(Urtica)植物麻葉蕁麻(Urtica cannabina L.)主要分布于我國西北、東北、華北及四川等地，全草或根入藥，具有祛風(fēng)除濕，活血，解痙，解蛇毒等功效。近年來國外對于同屬的大蕁麻(Urtica dioica L.)研究較多，其具有顯著的生物活性，并已將其開發(fā)成多種治療風(fēng)濕及前列腺增生的藥物。國內(nèi)學(xué)者對裂葉蕁麻(U.fissa Pritz.)、狹葉蕁麻(U. angustifolia Fisch.ex Homem.)和

2、麻葉蕁麻的化學(xué)成分和生物活性也進(jìn)行了一些研究。藥理實(shí)驗(yàn)研究表明麻葉蕁麻籽有較好的抑菌作用；麻葉蕁麻根水煎液對狗有劑量依賴性降低血壓作用，對兔及蟾蛤心臟亦有明顯的強(qiáng)心作用；麻葉蕁麻葉水煎液有顯著的抗炎作用。本文對麻葉蕁麻葉的化學(xué)成分和多糖的活性及含量測定進(jìn)行了研究。 目的：對麻葉蕁麻葉極性的化學(xué)成分進(jìn)行研究，采用系統(tǒng)溶劑萃取法和硅膠、聚酰胺及葡萄糖凝膠柱色譜等分離方法對其化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)分離，得到單體化合物運(yùn)用UV、IR、1H-N

3、MR、13C-NMR、MS等波譜鑒定技術(shù)分析確定結(jié)構(gòu)式，為尋找其有效成分提供基礎(chǔ)性研究。運(yùn)用二甲苯所致小鼠鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)研究麻葉蕁麻多糖的抗炎活性。采用苯酚-硫酸比色法對麻葉蕁麻葉的多糖成分進(jìn)行含量測定。 方法：1、麻葉蕁麻葉化學(xué)成分的提取、分離及結(jié)構(gòu)鑒定：取干燥麻葉蕁麻葉5.4kg用70％乙醇加熱回流提取三次，合并濾液濃縮得到浸膏，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，分別得各部分萃取物。醋酸乙酯萃取物采用兩種分離方法：醋酸乙酯萃

4、取物11.1 g用聚酰胺柱色譜分離，30％、70％乙醇洗脫部分得到白色固體，分別經(jīng)硅膠柱色譜分離純化后得到化合物1(31 mg)和化合物2(22 mg)。醋酸乙酯萃取物9.4 g采用硅膠柱色譜分離，得到各流份進(jìn)一步經(jīng)硅膠色譜和HPLC分離，得到化合物3～7(分別為2 mg、28 mg、24 mg、40 mg、20 mg)。 正丁醇萃取物也采用兩種方法分離：正丁醇萃取物41.1g用硅膠柱色譜以及ODS反相色譜分離得到化合物5(24

5、 mg)和化合物8(5 mg)；正丁醇萃取物15 g過D101型大孔樹脂柱，用70％乙醇洗脫得到白色固體，進(jìn)一步純化得到化合物9(60 mg)。將所得化合物分別運(yùn)用化學(xué)方法和UV、IR、NMR、MS等波譜分析技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。 2、多糖抗炎活性研究：二甲苯致小鼠鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)：受試藥物的制備，采用石油醚脫脂后水提Sevage法除蛋白從麻葉蕁麻葉中提取制得精制多糖，精制多糖水溶后將其配制至0.2 mg/ml。采用二甲苯致小鼠鼠耳腫脹

6、藥理模型，阿司匹林為陽性對照物，觀察不同組小鼠耳廓腫脹程度差異。 3、麻葉蕁麻葉多糖的含量測定：采用苯酚-硫酸法測定多糖的含量：(1)多糖提取與精制：采用加熱回流法提取多糖，經(jīng)去脂、去蛋白等步驟純化，得精制多糖。(2)苯酚試液的制備：將苯酚蒸餾后，加水溶解，備用。(3)供試品溶液的制備：供試品采用超聲水液提取法，定容后備用。(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：配置合適濃度的葡萄糖溶液，選擇合適的波長，測定吸收度。(5)重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)：精密稱取5份

7、藥材制備供試品溶液，測定吸收度，考察分析方法重現(xiàn)性。(6)加樣回收率實(shí)驗(yàn)：稱取已知含量的樣品，準(zhǔn)確加入一定量的對照品溶液，計(jì)算加樣回收率。(7)精密度實(shí)驗(yàn)：精密稱取5份藥材制備供試品溶液，測定吸收度，考察分析方法精密度。(8)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：測定多糖溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液、樣品溶液在一個(gè)小時(shí)之內(nèi)的吸光度以測定穩(wěn)定性。結(jié)果：1、麻葉蕁麻葉化學(xué)成分研究：通過溶劑提取法和色譜法從麻葉蕁麻葉70％乙醇提取物的醋酸乙酯和正丁醇萃取部分分離得到了9個(gè)化合物，

8、經(jīng)化學(xué)和波譜分析，確定了8個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，1個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)待定。它們分別鑒定為β-谷甾醇(1)，胡蘿卜苷(2)，棕櫚酸(4)，尿嘧啶(5)，(2S,3S，4R，8E)-2-[(2'R)-2'-羥基二十四烷酰胺]-8(E)-十八烯-1，3，4-三醇(6)，1-O-β-D-吡喃葡萄糖-(2S 3S 4R，8E)-2-[(2'R)-2'-羥基二十四烷酰胺]-8(E)-十八烯-1，3，4-三醇(苦瓜腦苷)(7)，胸腺嘧啶(8)，硝酸鉀(9)。其

9、中化合物5、6、7、8四個(gè)化合物為首次從蕁麻屬植物中分離得到。 2、多糖抗炎活性研究：麻葉蕁麻葉中的多糖對二甲苯所致小鼠鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，麻葉蕁麻葉多糖能夠有效抑制二甲苯所致的耳廓腫脹(P＜0.01)，其中低劑量(0.2 mg/ml)組和阿司匹林作用相當(dāng)(P＞0.05)，高劑量組則優(yōu)于阿司匹林(P＜0.01)。表明麻葉蕁麻葉多糖具有抗炎活性，并且隨濃度的增大，活性增強(qiáng)。 3、麻葉蕁麻多糖的含量測定：測定波長490 n

10、m，苯酚-硫酸顯色，回歸線性方程為C=0.0633A+0.0002，線性關(guān)系良好(r=0.9997)，麻葉蕁麻葉中多糖含量為5.96％，重現(xiàn)性RSD=4.13％，加樣回收率RSD=2.17％，樣品溶液穩(wěn)定性RSD=1.43％。結(jié)論：化學(xué)成分研究中提取溶劑、提取方法選擇適當(dāng)，采用硅膠、聚酰胺、葡聚糖凝膠等柱色譜法對麻葉蕁麻葉的極性化學(xué)成分實(shí)現(xiàn)了較好的分離及純化，分離并確定了8個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，4個(gè)化合物為首次從該屬植物中分離得到，為麻葉蕁麻