復(fù)方芪麻膠囊質(zhì)量控制研究.pdf

1、目的:
　　本課題是在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，以中藥復(fù)方制劑“復(fù)方芪麻膠囊”為研究對(duì)象，圍繞其質(zhì)量控制難題，綜合運(yùn)用現(xiàn)代分析技術(shù)和方法，在其原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化和提升，按照中藥新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究技術(shù)要求，開展原料藥入選標(biāo)準(zhǔn)研究，明確藥材來源、產(chǎn)地，并建立復(fù)方芪麻膠囊的綜合質(zhì)量控制方法。從整體上有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，為更好地保證臨床療效奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.原料藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
　　(1)原料藥材收集。收

2、集不同產(chǎn)地、不同批次的復(fù)方芪麻膠囊7味原料藥材（黃芪、天麻、茯苓、法半夏、化橘紅、澤瀉和川芎等7味藥材），并按照2015年版《中國藥典》一部項(xiàng)下收載的方法進(jìn)行檢測，采用合格的樣品開展后續(xù)研究。
　　(2)原料藥材指紋圖譜研究。采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)不同產(chǎn)地、不同批次的原料藥材進(jìn)行指紋圖譜研究，分別對(duì)樣品制備方法和色譜條件進(jìn)行優(yōu)選，并完成方法學(xué)考察，建立原料藥材HPLC指紋圖譜，應(yīng)用國家藥典委員會(huì)指紋圖譜相似度軟件進(jìn)行相似

3、度計(jì)算，并結(jié)合SPSS軟件對(duì)得到的指紋圖譜進(jìn)行評(píng)價(jià)，最終確定各味藥材的最佳產(chǎn)地。
　　2.復(fù)方芪麻膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
　　(1)薄層定性鑒別。采用薄層色譜(TLC)法對(duì)制劑進(jìn)行定性鑒別研究，并進(jìn)行方法學(xué)考察;
　　(2)含量測定。以君藥黃芪所含的黃芪甲苷(ASI)和“打粉入藥”天麻所含的天麻素和對(duì)羥基苯甲醇三個(gè)指標(biāo)成分為指標(biāo)，采用HPLC法建立含量測定方法，并進(jìn)行方法學(xué)考察。
　　(3)膠囊劑項(xiàng)下檢查。按照膠囊劑

4、項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定（《中國藥典》2015年版四部通則0103）對(duì)復(fù)方芪麻膠囊制劑進(jìn)行檢查項(xiàng)目研究。
　　3.復(fù)方芪麻膠囊指紋圖譜建立。
　　采用超高效液相(UPLC-DAD)法和高效液相-蒸發(fā)光散射檢測器(HPLC-ELSD)法分別建立復(fù)方芪麻膠囊UPLC-DAD指紋圖譜和HPLC-ELSD指紋圖譜，并對(duì)所建立方法進(jìn)行方法學(xué)考察。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2004年版）進(jìn)行相似度分析，并通過與陰性對(duì)照及藥材對(duì)照

5、色譜峰進(jìn)行比對(duì)，確定共有峰歸屬及成分指認(rèn)。
　　4.復(fù)方芪麻膠囊的多指標(biāo)成分同時(shí)測定。
　　采用UPLC法建立多指標(biāo)成分定量分析方法，并進(jìn)行方法學(xué)考察。
　　結(jié)果:
　　1.(1)分別收集了不同來源、不同批號(hào)的黃芪15批、茯苓43批、法半夏10批、化橘紅11批、天麻12批、澤瀉11批和川芎13批，均按照《中國藥典》2015年版一部各品種項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定收載方法進(jìn)行檢測，均符合規(guī)定，可以應(yīng)用到后續(xù)的研究。
　　(

6、2)建立了復(fù)方芪麻膠囊的原料藥材（黃芪、茯苓、法半夏、化橘紅、澤瀉、天麻和川芎等7味藥材）HPLC指紋圖譜，所建立的HPLC指紋圖譜中各共有特征指紋峰分離度均較好，具有較強(qiáng)的專屬性。
　　2.(1)優(yōu)化了復(fù)方芪麻膠囊原標(biāo)準(zhǔn)中黃芪、天麻的TLC鑒別方法，新建了復(fù)方芪麻膠囊中川芎和化橘紅的TLC鑒別方法。
　　(2)建立了復(fù)方芪麻膠囊中黃芪的ASI含量和天麻的天麻素及對(duì)羥基苯甲醇總含量的測定方法。ASI、天麻素、對(duì)羥基苯甲醇分別

7、在1.007～10.064μg(r=0.9995)、0.080～0.598μg(r=0.9995)、0.043～0.320μg(r=0.9999)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率分別為1.79％、0.35％和0.43％。
　　(3)照膠囊劑項(xiàng)下（《中國藥典》2015年版第四部通則0103）裝量差異、水分、崩解時(shí)限和重金屬方法進(jìn)行檢查，結(jié)果均符合膠囊劑要求。
　　3.建立了復(fù)方芪麻膠囊的UPLC指紋圖譜和HPLC-ELSD指紋圖

8、譜共有模式。在UPLC指紋圖譜中標(biāo)定了22個(gè)共有峰，并對(duì)其中8個(gè)特征峰進(jìn)行了指認(rèn)，分別為6＃天麻素、8＃5-羥甲基糠醛(5-HF)、14＃毛蕊異黃酮葡萄糖苷(CG)、16＃野漆樹苷、17＃柚皮苷、20＃芒柄花素葡萄糖苷(FG)、21＃毛蕊異黃酮和22＃芒柄花素;從HPLC-ELSD指紋圖譜中分析得到8個(gè)共有峰，并確定了3＃ASI和8＃芒柄花素2個(gè)成分。10批復(fù)方芪麻膠囊樣品UPLC指紋圖譜和HPLC-ELSD指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜的相似

9、度均在0.90以上。
　　4.建立了復(fù)方芪麻膠囊多指標(biāo)成分定量分析方法，指標(biāo)成分天麻素、5-HF、CG、野漆樹苷、柚皮苷、FG和毛蕊異黃酮均能達(dá)到基線分離，峰形對(duì)稱。天麻素、5-HF、CG、野漆樹苷、柚皮苷、FG和毛蕊異黃酮分別在5.976～29.880μg·mL-1(r=1.0000)、10.596～52.980μg·mL-1(r=0.9999)、2.697～13.485μg·mL-1(r=1.0000)、2.262～11.30

10、9μg·mL-1(r=1.0000)、40.768～203.840μg·mL-1(r=1.0000)、5.825～29.126μg·mL-1(r=1.0000)、0.372～1.858μg·mL-1(r=0.9999)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率(n=6)分別為1.04％、1.30％、1.81％、1.41％、1.29％、1.01％、1.48％，不同批次復(fù)方芪麻膠囊天麻素、5-HF、CG、野漆樹苷、柚皮苷、FG和毛蕊異黃酮7個(gè)指標(biāo)成分的

11、含量存在差別，含量分別在3.182～3.855 mg·g-1、1.710～3.791 mg·g-1、0.107～～0.286 mg·g-1、0.157～0.346 mg·g-1、8.853～10.726 mg·g-1、0.282～0.692 mg·g-1、0.097～0.135 mg·g-1之間。
　　結(jié)論:
　　本論文對(duì)中藥復(fù)方制劑復(fù)方芪麻膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了系統(tǒng)性研究，所建立的原料藥材和制劑指紋圖譜及其定量定性測定分析方