硫酸吲哚酚影響人單核細胞源樹突狀細胞免疫功能的相關(guān)研究.pdf

1、心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)是慢性腎臟疾病(chronic kidneydisease，CKD)患者最主要的死亡原因。CKD患者動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的進展極為迅速，極易發(fā)生嚴重的冠狀動脈疾病;雖然接受常規(guī)透析治療可以糾正尿毒癥患者的內(nèi)環(huán)境，但仍有超過50％的患者最終因CVD而死亡。
　　硫酸吲哚酚(Indoxyl sulfate，IS)是一種親蛋白質(zhì)化合物的尿毒

2、素，不能被目前的透析治療方式有效清除。IS被認為參與到透析患者AS的發(fā)病機制之中，既往研究發(fā)現(xiàn)IS可通過破壞血管內(nèi)皮功能、促使血管平滑肌細胞增生、加速血管鈣化等來發(fā)揮致AS作用，但具體機制尚不明確。近年來，有學(xué)說認為AS是一種慢性炎癥和自身免疫性疾病，而樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)在AS的炎癥進展上發(fā)揮了重要的作用。試圖探究IS是否可啟動DCs發(fā)揮相關(guān)免疫作用，促進AS的炎癥進展，從而為IS參與AS的病理過程提供

3、更多的理論依據(jù)。
　　第一部分 人單核細胞源樹突狀細胞的體外誘導(dǎo)與鑒定
　　目的:
　　應(yīng)用改良雙密度梯度離心法與細胞因子誘導(dǎo)結(jié)合的方法分離和培養(yǎng)人單核細胞源樹突狀細胞(monocyte-derived dendritic cells，mo-DCs)，為進一步研究DCs的免疫作用奠定實驗基礎(chǔ)。
　　方法:
　　利用改良雙密度梯度離心法分離人純化的單核細胞，用rhGM-CSF(1000IU/mL)和rhIL-

4、4(500IU/mL)體外誘導(dǎo)，倒置相差顯微鏡每天觀察細胞狀態(tài)，培養(yǎng)5天后獲得mo-DCs，電子顯微鏡觀察細胞形態(tài)，流式細胞儀進行表型鑒定。
　　結(jié)果:
　　1、30mL外周血可分離并培養(yǎng)出mo-DCs約(3-6)×106個，臺盼藍染色后細胞存活率平均＞90％;
　　2、倒置相差顯微鏡及電子顯微鏡觀察細胞呈典型樹突狀細胞形態(tài);
　　3、流式細胞儀檢測表達CD11c陽性的細胞可達90％以上，獲得純度較高mo-DCs

5、。
　　結(jié)論:
　　本實驗選用的方法簡單、快速，可分離誘導(dǎo)出純度較高的mo-DCs，可用于后續(xù)實驗研究。
　　第二部分 硫酸吲哚酚對人單核細胞源樹突狀細胞免疫功能的影響
　　目的:
　　探討IS對mo-DCs的分化、成熟及免疫功能的影響，為進一步探索IS在AS免疫炎癥反應(yīng)中的機制提供依據(jù)。
　　方法:
　　上述方法獲得mo-DCs，此時為未成熟樹突狀細胞(immature dedritic ce

6、lls，imDCs)，用不含血清的RPMI1640繼續(xù)培養(yǎng)24h后，第6天將imDCs隨機分為5組:PBS組、LPS組（1μg/mL）、IS.1組(30μmol/L)、IS.2組(300μmol/L)、IS.3組(600μmol/L)。刺激24h后流式細胞儀檢測各組細胞表型和吞噬功能變化，ELISA法檢測各組細胞分泌細胞因子IL-12p70的水平變化，電子顯微鏡觀察細胞形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果:
　　不同濃度IS作用于imDC