氧化應(yīng)激相關(guān)因子在特發(fā)性膜性腎病表達(dá)的研究.pdf

1、背景：
　　膜性腎?。╩embranous nephropathy，MN）或膜性腎小球腎炎是成人腎病綜合征常見的原因之一，為一種腎小球病，在大多數(shù)患者中的組織病理學(xué)表現(xiàn)為腎小球上皮細(xì)胞下免疫復(fù)合物沉積伴腎小球基底膜（ glomerular basement membrane,GBM）彌漫性增厚。在發(fā)達(dá)國家中大約75％的 MN病例是特發(fā)性或原發(fā)性膜性腎?。╥diopathic membranous nephropathy，IMN），

2、其余的膜性腎病與一些基礎(chǔ)疾病有關(guān)，這些疾病包括自身免疫性疾病、乙肝或丙肝病毒感染及其它慢性感染、既往接觸的藥物或毒素以及惡性腫瘤等。特發(fā)性膜性腎病臨床預(yù)后差異較大，在兒童患者中自發(fā)緩解比較常見，而在成人中也有25-30％患者可自發(fā)緩解；但約10%～40%的患者無論治療或不治療在10年后則可進(jìn)展為終末期腎?。╡nd-stage renal disease，ERSD），其余的患者則表現(xiàn)為持續(xù)的蛋白尿，但是腎功能則保持相對(duì)穩(wěn)定。既往國內(nèi)相關(guān)資

3、料顯示，IMN約占原發(fā)性腎小球腎炎的9.89%～13.3%。近年來，在國外的回顧性調(diào)查研究(2005年一2010年)中，發(fā)現(xiàn) IMN已成為原發(fā)性腎小球疾病的第二大病理類型，約占27．5％，是之前十年的2倍多。因此，探索IMN的發(fā)病機(jī)制，降低IMN的發(fā)病率，對(duì)于慢性腎臟病的防治具有重大意義。
　　氧化應(yīng)激（oxidative stress, OS）是指當(dāng)各種有害刺激打擊機(jī)體時(shí)活性氧生成和抗氧化防御系統(tǒng)失去平衡后機(jī)體所處的一種狀態(tài)。這

4、種狀態(tài)可在活性氧（reactive oxy-gen species,ROS）的產(chǎn)生超過抗氧化劑的防御時(shí)或者在抗氧化劑活性降低或抗氧化劑減少時(shí)發(fā)生。當(dāng)機(jī)體遭受有害刺激時(shí)ROS就會(huì)受到一系列的電子化學(xué)反應(yīng)大量產(chǎn)生以至于超過機(jī)體的清除能力,大量的ROS會(huì)進(jìn)一步的造成人體的重要物質(zhì)如核酸、碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂類等的氧化損傷。氧化應(yīng)激相關(guān)因子超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、血紅素氧合酶-1（heme oxyg

5、enase，HO-1）是目前公認(rèn)的抗氧化指標(biāo)，能夠清除體內(nèi)超氧陰離子自由基；是氧自由基的清除劑；丙二醛（malondiadehyde，MDA）是機(jī)體受到刺激時(shí)不飽和脂肪酸受到 ROS的攻擊，通過脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，產(chǎn)生的過氧化終產(chǎn)物；8-羥基脫氧鳥苷（8-Hydroxy-2'-deoxyguanosine，8-OHdG）是ROS作用于DNA的終產(chǎn)物;他們是反映體內(nèi)脂質(zhì)及DNA氧化損傷程度的標(biāo)志物。目前氧化應(yīng)激在高血壓腎病、糖尿病腎病、間質(zhì)性

6、腎炎及急性腎損傷等腎臟疾病中的作用已有較多研究證實(shí)，而氧化應(yīng)激發(fā)揮的作用在IMN的發(fā)病機(jī)制的發(fā)生發(fā)展中所處地位目前尚不明確。
　　目的：
　　1.探索氧化應(yīng)激相關(guān)因子 SOD、HO-1、MDA、8-OHdG在 IMN、繼發(fā)性膜性腎病（secondary membranous nephropathy,SMN）、微小病變性腎病（minimal change nephropathy,MCD）及正常對(duì)照組（normal contro

7、l,NC）各組血、尿中的表達(dá)情況；
　　2.探索氧化應(yīng)激相關(guān)因子SOD、HO-1、8-OHdG在IMN、SMN、MCD及NC各組腎臟組織中的表達(dá)情況；
　　3.分析探討氧化應(yīng)激相關(guān)因子SOD、HO-1、MDA、8-OhdG與特發(fā)性膜性腎病發(fā)病機(jī)制之間的關(guān)系。
　　方法：
　　選取2016年1月至2016年6月期間被鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科收治入院的特發(fā)性膜性腎病（IMN）40例、微小病變性腎病(MCD)20例、

8、繼發(fā)性膜性腎病（SMN）20例，入選患者均為首次腎穿刺病理檢查確診者，且在活檢前未運(yùn)用免疫抑制劑進(jìn)行過治療；另選取我院泌尿外科行腎臟腫瘤切除術(shù)后遠(yuǎn)離腫瘤端的正常腎臟組織6例及體檢中心排除腎臟疾病后的健康人20例作為對(duì)照組。收取腎活檢組織后，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)氧化應(yīng)激相關(guān)因子 SOD、H0-1、8-OHdG在各組腎組織的表達(dá)，分析氧化應(yīng)激相關(guān)因子在腎小球及小管的分布情況以及在各組之間的表達(dá)強(qiáng)度；同時(shí)收集各組晨尿及血液標(biāo)本，用ELIS

9、A定量方法檢測(cè)SOD、HO-1、MDA、8-OHdG在血、尿標(biāo)本的表達(dá)，分析這些因子在各實(shí)驗(yàn)組之間的表達(dá)強(qiáng)度；并探討IMN組中各氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)與尿蛋白/肌酐（urinary protein urine creatinine ratio,uPCR）的相關(guān)性；
　　結(jié)果：
　　1.運(yùn)用免疫組化法測(cè)定氧化應(yīng)激相關(guān)因子 SOD、HO-1及8-OHdG在各組腎組織中的分布及表達(dá)；結(jié)果顯示 SOD普遍表達(dá)于腎小管和腎小球，且在腎小管中

10、的表達(dá)分布較腎小球中廣泛，其在IMN組及 SMN組比NC組表達(dá)明顯增多（P<0.05），在IMN組及SMN組的表達(dá)差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；HO-1在IMN組及SMN組的表達(dá)較MCD組及NC組明顯增多（P<0.05），在IMN組與SMN組表達(dá)差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），其在腎小球及腎小管中均有表達(dá)；8-OHdG主要表達(dá)于腎小球及腎小管中的細(xì)胞核，在胞質(zhì)有較少表達(dá)，其在IMN及SMN組的表達(dá)明顯高于MCD組及NC組（

11、P<0.05），在IMN組與SMN組表達(dá)差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.運(yùn)用 ELISA定量方法檢測(cè)氧化應(yīng)激相關(guān)因子 SOD、HO-1、MDA及8-OHdG在各組血、尿標(biāo)本中的表達(dá)情況；SOD在IMN組血清的表達(dá)中與SMN組無明顯差異（P>0.05），卻明顯高于MCD組及NC組（P<0.01）；在IMN組尿液中表達(dá)比NC組的表達(dá)高（P<0.01），與SMN及MCD組均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；HO-1、MD

12、A及8-OHdG在IMN組血液中表達(dá)均明顯高于MCD及NC組（P<0.05），與SMN組比較無明顯差異（P>0.05）；在MCD組的表達(dá)與NC組無明顯差異（P>0.05）；HO-1、MDA及8-OHdG在IMN組尿液中的表達(dá)亦與 SMN組的表達(dá)無明顯差異（P>0.05），則均高于 MCD及 NC組（P<0.05），而在MCD組的表達(dá)也均高于NC組的表達(dá)（P<0.05）。
　　3.將.IMN組尿液中氧化應(yīng)激相關(guān)因子SOD、8-OHd

13、G、HO-1及MDA的表達(dá)與尿蛋白/肌酐（uPCR）做相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析，HO-1及SOD與uPCR無明顯相關(guān)性，而8-OHdG及 MDA與uPCR呈顯著正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.氧化應(yīng)激相關(guān)因子SOD、8-OHdG、HO-1及MDA在IMN患者中表達(dá)升高；
　　2.氧化應(yīng)激反應(yīng)可以導(dǎo)致脂質(zhì)、DNA、蛋白質(zhì)氧化損傷；
　　3.氧化應(yīng)激與臨床密切相關(guān)，在一定程度上證實(shí)了氧化應(yīng)激參與了IMN的發(fā)生