Semaphorin 3A殼聚糖微球-絲素基α磷酸三鈣骨水泥細胞毒性及成骨性能研究.pdf

1、目的：制備復合Semaphorin3A殼聚糖微球-絲素基α-磷酸三鈣骨水泥(Semaphorin3A Chitosan Microspheres/Silk Fibroin/α-Tricalcium,Sema3A CMs/SF/α-TCP)，并對該材料進行細胞毒性及體外成骨性能評估。
　　方法：
　　1.通過將家蠶生絲脫膠、溶解、透析、濃縮四個步驟制備絲素溶液，使用乳化交聯(lián)法制備微米級殼聚糖微球，使用膨脹吸附法制備Sema3A

2、載藥殼聚糖微球，使用液-固法制備Sema3A CMs/SF/α-TCP，同時制備CMs/SF/α-TCP及SF/α-TCP。
　　2.使用Sema3A ELISA試劑盒對CM的載藥情況和Sema3A CMs/SF/α-TCP的藥物釋放性能進行檢測。
　　3.制備材料浸提液，使用浸提液培養(yǎng)MC3T3-E1細胞系，設定陰性對照組和陽性對照組，通過MTT法及培養(yǎng)液乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase, LDH）活

3、性測定檢測材料的細胞毒性。4.將MC3T3-E1細胞分別種植于Sema3A CMs/SF/α-TCP、CMs/SF/α-TCP及SF/α-TCP材料表面，使用掃描電鏡觀察Sema3A CMs/SF/α-TCP材料表面的細胞形態(tài)，分別檢測其細胞培養(yǎng)液中的堿性磷酸酶（Alkline Phosphatase, ALP）活性，并通過RT-qPCR，檢測其成骨相關基因 Runx2、Col-1及ALP的表達情況。
　　結果：
　　1.使

4、用乳化交聯(lián)法成功制備出微米級殼聚糖微球，微球形態(tài)規(guī)則，分散良好。微球載藥率為0.41μg/mg，Sema3A CMs/SF/α-TCP材料可持續(xù)釋放Sema3A達30天，第30天的釋放率為91.73％。
　　2. Sema3A CMs/SF/α-TCP材料的細胞毒性為0級或1級。
　　3.MC3T3-E1細胞系在材料表面形態(tài)良好，能夠伸出偽足貼附于材料表面。
　　4. Sema3A CMs/SF/α-TCP組的細胞培養(yǎng)

5、液ALP活性在培養(yǎng)后的第14天和第21天高于其他分組，其中14天時間點各組ALP活性差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），21天時間點的ALP活性差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。5.在培養(yǎng)后的14天，Sema3A CMs/SF/α-TCP組中的成骨相關基因表達高于其他實驗分組，且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結論：復合Sema3A CMs/SF/α-TCP材料能夠有效負載Sema3A并緩慢釋放Sema3A，支持MC3T3