幾種斑蝥素金屬衍生物抗肝癌活性評價及斑蝥素酸鎂的抗癌作用機制研究.pdf

1、目的：探討與鎂元素處于同一主族的其它金屬元素（如鈣、鍶）與斑蝥素結(jié)合后對其抗肝癌活性影響的變化規(guī)律；并在此基礎(chǔ)上完成基于RNA-seq測序技術(shù)的斑蝥素酸鎂抗肝癌機制的初步研究，為后續(xù)深入闡明斑蝥素酸鎂抗癌機制以及新靶點的發(fā)現(xiàn)做前期準(zhǔn)備工作。
　　方法：⑴以斑蝥素為陽性對照化合物，以肝癌HepG2細(xì)胞和SMMC-7721細(xì)胞為測試細(xì)胞株；通過檢測細(xì)胞增殖、細(xì)胞集落、形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡等指標(biāo)的方法，系統(tǒng)比較斑蝥素酸鎂、斑蝥

2、素酸鈣、斑蝥素酸鍶的抗肝癌活性差異。⑵利用RNA-seq測序技術(shù)檢測斑蝥素酸鎂作用于肝癌HepG2細(xì)胞后轉(zhuǎn)錄組水平的變化情況；并輔以生物信息學(xué)的分析手段篩選出顯著差異表達(dá)基因（或非編碼RNA），再結(jié)合文獻(xiàn)調(diào)研的方法對差異基因（或非編碼RNA）進(jìn)行深入分析，探討這些差異基因（或非編碼RNA）在斑蝥素酸鎂抗肝癌效應(yīng)中扮演的角色和可能存在的分子機制。
　　結(jié)果：①幾種斑蝥素金屬衍生物都能抑制人肝癌細(xì)胞HepG2和SMMC-7721的增殖

3、，其抑制增殖活性強弱的排列順序為：斑蝥素酸鎂>斑蝥素>斑蝥素酸鈣>斑蝥素酸鍶。②斑蝥素酸鎂、斑蝥素、斑蝥素酸鈣和斑蝥素酸鍶作用濃度為0.7μg/mL時， HepG2的集落形成率分別為0、6.6±2.1％、53.3±0.9%和56.5±2.1%；而SMMC-7721的集落形成率分別為0、8.2±1.4%、45.3±2.1%和46.6±1.6%。③在斑蝥素酸鎂和斑蝥素作用下兩種肝癌細(xì)胞的形態(tài)明顯皺縮變圓，而熒光染色后與control組相比，

4、細(xì)胞核熒光強度明顯增強。④流式技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果為：斑蝥素酸鎂、斑蝥素、斑蝥素酸鈣和斑蝥素酸鍶作用濃度為3μg/mL時，HepG2的細(xì)胞凋亡率分別為12.26±1.89%、9.31±0.56%、4.88±0.62%和6.6±1.21%；而 SMMC-7721的細(xì)胞凋亡率分別為10.85±0.59%、7.12±0.61%、2.23±1.12%和1.95±0.42%。⑤流式技術(shù)檢測細(xì)胞周期結(jié)果為：斑蝥素酸鎂、斑蝥素、斑蝥素酸鈣和斑蝥素酸鍶

5、作用濃度為3μg/mL時， HepG2的G2/M分別為49.11±0.54%、44.39±1.92%、30.42±1.01%和20.21±2.54%；而 SMMC-7721的G2/M分別為37.63±1.29%、30.51±1.13%、21.20±2.31%和13.22±2.08%。⑥根據(jù)>1、同時probability>0.8為閾值，過濾差異表達(dá)基因。共篩選出199個顯著差異表達(dá)的基因（包括蛋白編碼基因、非編碼RNA、假基因和一些其他

6、未知功能的RNA），其中有117個顯著上調(diào)，而81個顯著下調(diào)，通過文獻(xiàn)調(diào)研，發(fā)現(xiàn)了6個可能是斑蝥素酸鎂的關(guān)鍵應(yīng)答基因，包括3個蛋白編碼基因和3個IncRNA。
　　結(jié)論：⑴在體外抗肝癌活性方面，本文所測試的四種化合物活性強弱的排列順序為：斑蝥素酸鎂>斑蝥素>斑蝥素酸鈣>斑蝥素酸鍶。⑵第二主族的三種堿土金屬元素（鎂、鈣、鍶）與斑蝥素結(jié)合后的產(chǎn)物的體外抗肝癌活性存在巨大差異，說明金屬元素在影響斑蝥素抗癌活性方面扮演著重要的角色，其中鎂