紅斑丹毒絲菌的致病性研究及其表面蛋白的MALDI-TOF質(zhì)譜分析.pdf

1、丹毒病是一種廣泛分布于全世界的古老疾病，紅斑丹毒絲菌是該疾病的主要病原體，其特殊的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)賦予了其獨(dú)特的生存方式，這種適應(yīng)性極強(qiáng)的細(xì)菌對(duì)全世界的養(yǎng)殖業(yè)和公共衛(wèi)生系統(tǒng)都是一大威脅。
　　在本研究中，小鼠致病性試驗(yàn)、補(bǔ)體抗性試驗(yàn)和抗吞噬試驗(yàn)被用來(lái)比較紅斑丹毒絲菌的致病性，分別以半致死劑量(LD50)，血清敏感性和吞噬指數(shù)作為衡量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果顯示：S型紅斑丹毒絲菌在小鼠毒力模型中表現(xiàn)出了很強(qiáng)的致病性，C43065株和C43311株的腹腔

2、注射半致死劑量(LD50)分別為81.59 CFU和191.04CFU，而注射了R型紅斑丹毒絲菌的小鼠全部正常。在抗吞噬指數(shù)這一項(xiàng)上，S型紅斑丹毒絲菌也顯著強(qiáng)于R型菌株。對(duì)血清中的補(bǔ)體成分的抵抗力的表現(xiàn)上，S型紅斑丹毒絲菌的繁殖速率基本沒(méi)有受到影響，明顯強(qiáng)于繁殖速率降低了一倍的R型紅斑丹毒絲菌。
　　以 groEL基因作為分子標(biāo)記所進(jìn)行的測(cè)序及系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果表明，C43065株、C43001株C43309株和C43311株紅斑丹

3、毒絲菌的groEL基因長(zhǎng)度全部為1614 bp，能編碼一個(gè)長(zhǎng)537個(gè)氨基酸的熱休克蛋白 HPS60，這段基因序列與已公布的紅斑丹毒絲菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC19414和扁導(dǎo)體丹毒絲菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC43339的 groEL基因有著很高的相似性，16S rRNA編碼基因的測(cè)序結(jié)果表明，長(zhǎng)度為1351 bp的該段序列與上述兩種標(biāo)準(zhǔn)株的同源性均為99％。通過(guò)MAGA軟件的最大簡(jiǎn)約算法(maximum parsimony method)的進(jìn)行的系統(tǒng)發(fā)育分

4、析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，四株細(xì)菌均屬于在紅斑丹毒絲菌屬，已兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)株作為對(duì)照參考的分析結(jié)果表明，在屬內(nèi)的種間鑒別上，groEL基因序列有著更高的分辨率。根據(jù)伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)Jones的研究，紅斑丹毒絲菌可按菌體形態(tài)、菌落大小、表面特征、透明度和顏色、邊沿特征六項(xiàng)表型特征差異被分成 S型和R型，分析結(jié)果表明具有強(qiáng)致病性的 C43065株和C43001株屬于S型，無(wú)致病性的C43309株和C43311株屬于R型。
　　為了研究導(dǎo)致紅斑丹毒絲菌

5、不同菌株致病性差異的原因，對(duì)C43065株、C43001株、C43309株和C43311株紅斑丹毒絲的表面蛋白進(jìn)行了分離提取，經(jīng)蛋白電泳分離后，用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間（MALDI-TOF）質(zhì)譜儀對(duì)電泳條帶中的蛋白進(jìn)行了肽質(zhì)量指紋圖譜的鑒定分析。從鑒定比對(duì)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)了10種與已報(bào)到的毒力因子相同或相似的蛋白，但并未發(fā)現(xiàn)各菌株的表面蛋白之間的種類(lèi)差異。
　　酶聯(lián)接免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)的特異性和敏感性能定量的反映針對(duì)特定抗