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文檔簡介
1、目的:觀察不同缺氧條件下胃腺癌細(xì)胞系BGC-823中HIF-1α、HIF-2α、HIF-1β和VEGF的表達(dá),探討三種HIF因子在低氧條件下調(diào)控胃癌血管生成的作用差異。
方法:分別用150、200、250、275μmol/L CoCl2模擬腫瘤內(nèi)部缺氧,缺氧時間分別為:2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h。采用實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR)和Western blot法檢測HIF-1α、HIF-2
2、α、HIF-1β和VEGF的mRNA及蛋白表達(dá)情況。進(jìn)一步運(yùn)用RNA干擾(RNA interference, RNAi)技術(shù)采用小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默BGC-823細(xì)胞,比較三者沉默VEGF的效果。
結(jié)果:⑴與常氧時比較,缺氧后HIF-1α、HIF-2α、VEGF的mRNA及蛋白表達(dá)均隨CoCl2濃度增加、時間延長而增加,但三者變化趨勢不一致, HIF-1α在缺氧早期迅速升高
3、,之后快速下降;HIF-2α和VEGF則在缺氧晚期表達(dá)最高,之后保持穩(wěn)定。HIF-1βmRNA和蛋白在常氧或缺氧下表達(dá)均無明顯變化(P>0.05)。⑵細(xì)胞分別特異性轉(zhuǎn)染 HIF-1α、HIF-2α和HIF-1βsiRNA后均能有效沉默各自基因的表達(dá),同時VEGF的表達(dá)水平也隨之降低,且隨HIF-2α的下調(diào)幅度最顯著(P<0.05)。
結(jié)論:①BGC-823胃癌細(xì)胞中HIF-1α、HIF-2α和HIF-1β對乏氧刺激表現(xiàn)出不同的
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