魚藤素在哮喘小鼠過敏性氣道炎癥中的作用及其機制研究.pdf

1、哮喘是全球最常見的呼吸系統(tǒng)疾病之一，它是一種以氣道炎癥和氣道高反應為主要特征的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，可以累及所有年齡組人群，嚴重危害人類健康，給病人以及社會帶來沉重的經濟負擔。哮喘的發(fā)病機制十分復雜，包括不同淋巴細胞亞群的失平衡，嗜酸性粒細胞的氣道浸潤，肺泡巨噬細胞功能異常及多種細胞因子和免疫球蛋白過度表達等。盡管近年來對哮喘的機制研究已有了很大的進展，但是目前仍然缺乏有效的治療手段來很好地控制較難治的哮喘及其相關的炎癥反應。近年來，許多傳

2、統(tǒng)中藥對于哮喘的治療作用逐漸受到人們的關注。魚藤素是豆科藤本植物家族的重要組成部分。在腫瘤小鼠模型中，它能夠通過抑制磷脂酰肌醇3激酶信號通路產生抗增殖作用。不僅如此，也有文獻報道魚藤素能夠有效地抑制核轉錄因子kappa B(NF-κB)信號通路，具有很強的抗炎作用。目前，魚藤素在哮喘相關的過敏性氣道炎癥反應中的作用及其機制尚未明確。
　　本研究中，我們以卵白蛋白致敏聯(lián)合霧化激發(fā)的方法建立小鼠急性哮喘模型，用魚藤素或地塞米松進行腹腔

3、注射治療哮喘小鼠。首先，我們通過小鼠肺泡灌洗及細胞分類計數方法明確氣道炎癥細胞的分類及浸潤程度，通過肺組織病理切片進行蘇木素-伊紅和過碘酸-希夫染色方法分析肺組織炎癥細胞浸潤及黏液蛋白分泌，通過無創(chuàng)肺功能儀檢測哮喘小鼠的氣道高反應性。然后，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測小鼠血清免疫球蛋白和細胞因子水平，通過逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測輔助型T細胞(Th)2型細胞因子及炎癥相關因子的基因表達，通過流式細胞術檢測胸腺基質淋巴細胞生

4、成素的表達，探討魚藤素對哮喘小鼠體內炎癥反應的作用。隨后，我們進一步用魚藤素處理人支氣管上皮細胞(BEAS-2B)，通過細胞活性檢測試驗檢測藥物的細胞毒性、通過RT-PCR方法檢測炎癥相關因子的基因表達。最后，我們用魚藤素和NF-κB抑制劑—BAY11-7082單獨或共同處理BEAS-2B細胞，用免疫印跡法檢測NF-κB信號通路上下游蛋白的表達，探討魚藤素對于哮喘相關炎癥反應的作用及分子機制。
　　本研究發(fā)現(xiàn):在哮喘模型小鼠體內，

5、魚藤素能夠有效的減少卵白蛋白誘導的炎癥細胞浸潤，減輕肺組織的炎癥反應和黏液生成，抑制氣道高反應性，減少血清免疫球蛋白和Th2型細胞因子的表達水平，并呈現(xiàn)濃度依賴的變化。同時，我們在體內和體外實驗中發(fā)現(xiàn)，魚藤素能夠下調與NF-κB信號通路密切相關的炎癥基因的表達，增強κB抑制因子α(IκBα)與NF-κB成員的結合能力，使NF-κB p65三聚體持續(xù)處于失活狀態(tài)，進而抑制NF-κB p65和IκBα的磷酸化，減少IκBα的降解和p65入核