升陽益胃湯對慢性萎縮性胃炎(CAG)大鼠Th1-Th2平衡以及EGF表達的影響.pdf

1、目的：通過對慢性萎縮性胃炎（CAG）實驗動物模型為基礎(chǔ)的大鼠Th1/Th2平衡及EGF表達的研究，選取病理組織學(xué)及特異性實驗室檢測指標，觀察升陽益胃湯對CAG免疫應(yīng)答Th1/Th2平衡及EGF表達的影響，探討此方對CAG的治療作用、機制；從中醫(yī)陰陽角度認識和防治此病進行研究；為藥效學(xué)量效關(guān)系的研究并開發(fā)新藥打下基礎(chǔ)。
　　方法：SPF級健康Wistar大鼠121只，雌雄各半，體重200±20g之間，常規(guī)喂養(yǎng)三天后，隨機抽取51只作

2、為治療組，其余70只為預(yù)防組。
　　從70只預(yù)防組大鼠中，隨機抽取10只為預(yù)防空白組（Ⅰ），正常喂食及給予自由飲水。其余60只大鼠采用免疫、氨水、酒精、水楊酸和去氧膽酸鈉等多因素刺激造模法，并結(jié)合饑飽失常連續(xù)造模10周復(fù)制大鼠CAG模型，在造模第7周始，按體重編號，隨機分為5組：預(yù)防模型組（Ⅱ）、預(yù)防對照組（Ⅲ）、中藥低劑量預(yù)防組（Ⅵ）、中藥中劑量預(yù)防組（Ⅴ）、中藥高劑量預(yù)防組（Ⅳ）。分組后在制模的同時，使中藥低劑量預(yù)防組、中藥中

3、劑量預(yù)防組、中藥高劑量預(yù)防組,分別用升陽益胃湯進行灌胃；預(yù)防對照組用硫糖鋁灌胃。第10周末停，同時停止造模，確認造模成功后處死大鼠。
　　51只治療組大鼠給予造模，方法同前，共10周，造模結(jié)束后分組，按體重編號，隨機分為4組：治療模型組（Ⅹ）、中藥低劑量治療組（Ⅸ）、中藥中劑量治療組（Ⅷ）、中藥高劑量治療組（Ⅶ）。分別給予中藥低劑量治療組、中藥中劑量治療組、中藥高劑量治療組升陽益胃湯進行灌胃，治療4周后處死大鼠。
　　于造模

4、第10周末分別從預(yù)防模型組、治療模型組大鼠中隨機抽取5只，處死取胃組織病檢，確認造模成功后，處死所有預(yù)防組大鼠，股動脈采血、切取脾和胸腺后稱重、采集胃組織樣本送檢。第14周末處死所有治療組大鼠，股動脈采血、切取脾和胸腺后稱重、采集胃組織樣本送檢。計算脾指數(shù)和胸腺指數(shù)；利用放射免疫法檢測各組大鼠胃組織中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6的含量并計算IFN-γ/IL-4，以觀察各組發(fā)生免疫應(yīng)答Th1/Th2平衡的問題；利用免疫組化法檢

5、測各組胃組織表皮生長因子EGF的表達。
　　結(jié)果：
　　1．脾指數(shù)和胸腺指數(shù)
　　與空白組相比，預(yù)防模型組大鼠脾和胸腺指數(shù)明顯降低（p<0.05），說明造模已經(jīng)成功；與預(yù)防模型組相比，預(yù)防對照組及預(yù)防各劑量組大鼠脾和胸腺指數(shù)升高差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）；與預(yù)防對照組比較，預(yù)防高、中、低劑量組脾和胸腺指數(shù)升高差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），以中劑量升高最為顯著；
　　與治療模型組相比，治療各劑量組明顯

6、升高差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），且高劑量組明顯升高（p<0.05）。
　　2．升陽益胃湯對大鼠胃組織、血清中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6用放免法檢測結(jié)果以及IFN-γ/IL-4的比值
　　與空白組相比，預(yù)防模型組IL-2、IFN-γ的分泌明顯降低，IL-4、IL-6分泌明顯升高，IFN-γ/IL-4明顯降低均有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）；與預(yù)防模型組相比，預(yù)防對照組及預(yù)防各劑量組IL-2、IFN-γ的分泌明

7、顯升高，IL-4、IL-6分泌明顯降低，IFN-γ/IL-4明顯升高有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），以中劑量改變最為顯著；與預(yù)防對照組相比，預(yù)防中劑量組IL-2、IFN-γ的分泌升高、IL-4、IL-6分泌明顯降低，IFN-γ/IL-4升高有差異（p<0.05）；
　　與治療模型組相比，治療各劑量組IL-2、IFN-γ的分泌明顯升高、IL-4、IL-6分泌明顯降低，IFN-γ/IL-4明顯升高差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），治療各

8、劑量組相比，高劑量組IL-2、IFN-γ的分泌明顯升高、IL-4、IL-6分泌明顯降低，IFN-γ/IL-4明顯升高有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。
　　3.免疫組化法檢測胃粘膜上皮中EGF的含量結(jié)果
　　與空白組相比，干預(yù)模型組大鼠胃粘膜上皮EGF表達增加有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），說明造模成功；與預(yù)防模型組相比，預(yù)防對照組、預(yù)防高劑量組、預(yù)防中劑量組、預(yù)防低劑量組EGF表達較前明顯降低有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）；與預(yù)防

9、對照組相比，預(yù)防中劑量組、預(yù)防高劑量組EGF表達較前明顯降低有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），以預(yù)防中劑量組降低最為顯著；
　　與治療模型組相比，治療各劑量組EGF表達較前明顯降低有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）；與治療低劑量組比較，治療高劑量組及治療中劑量組EGF表達較前明顯降低有統(tǒng)計學(xué)意
　　義（p<0.05），以治療高劑量組降低最為顯著。
　　結(jié)論：
　　1．CAG大鼠用此綜合造模法復(fù)制結(jié)果實驗?zāi)Ｐ统晒Α?br>　

10、　2．升陽益胃湯預(yù)防和治療可以顯著提高脾和胸腺指數(shù)；升陽益胃湯預(yù)防用藥和治療均可使慢性萎縮性胃炎大鼠胃組織和血清中IL-2、IFN-γ的分泌升高、IL-4、IL-6分泌降低，IFN-γ/IL-4的比值上調(diào)，從而調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡；升陽益胃湯預(yù)防用藥和治療均可降低大鼠胃粘膜EGF的表達。以上均以預(yù)防中劑量組和治療高劑量組指標表達變化最明顯，且均優(yōu)于硫糖鋁對照組，有統(tǒng)計學(xué)意義。證明升陽益胃湯可比較明顯改善炎癥狀態(tài)，調(diào)節(jié)T細胞功能，促進胃

11、組織粘膜修復(fù)，提高機體免疫調(diào)節(jié)功能。
　　3．用升陽益胃湯中劑量預(yù)防和高劑量治療效果明顯，即體現(xiàn)“未病先防，既病防變”的中醫(yī)治未病思想，也證明各組間有量效關(guān)系存在。
　　4.本實驗研究發(fā)現(xiàn)，升陽益胃湯對CAG模型大鼠有較好的治療作用,機制可能在于通過提高胸腺指數(shù)和脾指數(shù)；上調(diào)IL-2、IFN-γ的分泌，拮抗IL-4、IL-6分泌，上調(diào)IFN-γ/IL-4的比值，從而調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，并降低胃粘膜EGF的表達，達到減輕C