加味啟膈散對(duì)食管癌細(xì)胞TE1上皮間質(zhì)化的影響.pdf

1、從發(fā)病率來(lái)看，中國(guó)食管癌發(fā)病率及死亡率占全球總發(fā)病率的一半以上，因而食管癌成為我國(guó)腫瘤防治方面的重點(diǎn)。河北省作為食管癌高發(fā)地區(qū)，涉縣、磁縣、武安等地區(qū)的食管癌尤其高發(fā)，呈明顯的區(qū)域性。據(jù)相關(guān)部門(mén)的統(tǒng)計(jì)，河北省的這些地方是全國(guó)食管癌發(fā)病率4倍以上。河北省腫瘤醫(yī)院作為河北省內(nèi)最大的腫瘤醫(yī)院，將食管癌的防治作為首要任務(wù)。目前，手術(shù)是治療食管癌常用方法，單純手術(shù)治療5年生存率不超過(guò)20％，并且術(shù)后一年內(nèi)復(fù)發(fā)率達(dá)22%。
　　我們提出食管癌

2、的核心病機(jī)是“血液衰耗，胃脘干槁”，而常說(shuō)的氣郁、血瘀、痰阻都是伴隨著核心病機(jī)出現(xiàn)的不同表象。提出治療大法為“甘潤(rùn)濡養(yǎng)”，臨床應(yīng)用加味啟膈散可以明顯抑制接受手術(shù)后食管癌患者以及晚期患者腫瘤轉(zhuǎn)移情況。本實(shí)驗(yàn)探究加味啟膈散對(duì)食管癌上皮細(xì)胞間質(zhì)化的作用，揭示抑制食管癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制。
　　目的:探討加味啟膈散對(duì)食管癌細(xì)胞上皮細(xì)胞間質(zhì)化的影響，揭示加味啟膈散通過(guò)抑制食管癌細(xì)胞的上皮細(xì)胞間質(zhì)化，從而抑制食管癌細(xì)胞遷移侵襲能力，減少食管

3、癌的轉(zhuǎn)移。
　　方法:
　　1.本研究選用高分化食管鱗癌細(xì)胞TE1，分為對(duì)照組、加味啟膈散50μg/ml、加味啟膈散100μg/ml，加入加味啟膈散培養(yǎng)24小時(shí)后，分運(yùn)用Western blotting檢測(cè)三組食管癌細(xì)胞株細(xì)胞snail蛋白、cytokeratins14蛋白和Vimentin蛋白的用藥前后表達(dá)。
　　2.應(yīng)用激光共聚焦檢測(cè)對(duì)照組、加味啟膈散50μg/ml、加味啟膈散100μg/ml，加入加味啟膈散培養(yǎng)2

4、4小時(shí)后，對(duì)TE1細(xì)胞的結(jié)構(gòu)的影響。
　　3.應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)照組、加味啟膈散50μg/ml、加味啟膈散100μg/ml，加入加味啟膈散培養(yǎng)24小時(shí)后，對(duì)TE1細(xì)胞遷移能力的影響。
　　4.應(yīng)用Transwell法檢測(cè)對(duì)照組、加味啟膈散50μg/ml、加味啟膈散100μg/ml，加入加味啟膈散培養(yǎng)24小時(shí)后，對(duì)TE1細(xì)胞侵襲能力的影響。
　　結(jié)果:
　　1.Western blotting法測(cè)加味啟膈散對(duì)TE1

5、中snail蛋白、cytokeratins14蛋白和Vimentin蛋白的表達(dá)。snail蛋白結(jié)果顯示，對(duì)照組0.150±0.070，當(dāng)加味啟膈散濃度為50μg/ml時(shí)為0.121±0.003，當(dāng)加味啟膈散濃度為100μg/ml時(shí)0.034±0.004。Vimentin蛋白結(jié)果顯示，對(duì)照組0.163±0.005，當(dāng)加味啟膈散濃度為50μg/ml時(shí)為0.128±0.005，當(dāng)加味啟膈散濃度為100μg/ml時(shí)0.055±0.008。cyt

6、okeratins14蛋白結(jié)果顯示，對(duì)照組0.035±0.003，當(dāng)加味啟膈散濃度為50μg/ml時(shí)為0.038±0.003，當(dāng)加味啟膈散濃度為100μg/ml時(shí)0.033±0.001。
　　2.激光共聚焦檢測(cè)加味啟膈散對(duì) TE1結(jié)構(gòu)骨架蛋白角蛋白cytokeratins14的影響，結(jié)果顯示對(duì)照組呈現(xiàn)紡錘形或梭形的不規(guī)則的間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)；當(dāng)加味啟膈散濃度為50μg/ml時(shí)，較對(duì)照組更趨向于圓形或是方形的細(xì)胞形態(tài)；當(dāng)加味啟膈散100μ

7、g/ml時(shí)，TE1呈現(xiàn)橢圓形或方形的規(guī)則的上皮細(xì)胞形態(tài)。
　　3.劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)加味啟膈散對(duì)TE1遷移的影響，將TE1分為加味啟膈散50μg/ml、加味啟膈散100μg/ml組及對(duì)照組。12h后，結(jié)果顯示，對(duì)照組35.366±1.665，當(dāng)加味啟膈散濃度為50μg/ml時(shí)為57.166±2.000，當(dāng)加味啟膈散濃度為100μg/ml時(shí)77.566±3.066。24h后，對(duì)照組26.633±2.753，當(dāng)加味啟膈散濃度為50μg/ml

8、時(shí)為35.133±3.780，當(dāng)加味啟膈散濃度為100μg/ml時(shí)46.366±2.375。
　　4.Transwell法測(cè)加味啟膈散對(duì)TE1侵襲的影響。結(jié)果顯示，對(duì)照組105.626±3.785，當(dāng)加味啟膈散濃度為50μg/ml時(shí)為65.523±5.131，當(dāng)加味啟膈散濃度為100μg/ml時(shí)為25.366±4.131。
　　結(jié)論:
　　1.加味啟膈散可以抑制snail蛋白、Vimentin蛋白的表達(dá)（P<0.05）

9、。當(dāng)加味啟膈散濃度為100μg/ml時(shí)，對(duì)snail蛋白、Vimentin蛋白的抑制優(yōu)于加味啟膈散濃度為50μg/ml。
　　2.對(duì)照組、加味啟膈散50μg/ml組、加味啟膈散100μg/ml組中的cytokeratins14的表達(dá)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.加味啟膈散干預(yù)后的食管癌細(xì)胞由紡錘形或梭形的不規(guī)則的間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)橐?guī)則的橢圓形或方形的上皮細(xì)胞形態(tài)。
　　4.劃痕實(shí)驗(yàn)證實(shí)加味啟膈散可以抑制食管