不同濃度胎牛血清培養(yǎng)下骨髓間充質(zhì)干細胞誘導為心肌樣細胞的比較.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  研究不同濃度胎牛血清培養(yǎng)下骨髓間充質(zhì)干細胞的一般特性如形態(tài)、核型、增殖動力學、表型特點和分化成心肌樣細胞潛能等生物學性狀,并在低血清濃度下培養(yǎng)誘導后的心肌樣細胞,并觀察心肌樣細胞增殖和特異性蛋白的表達情況。
  方法:
  采用全骨髓貼壁的培養(yǎng)方法獲取大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)。在細胞傳到第2代時,分為5個組,加入含有不同濃度胎牛血清(FBS)的L-DMEM培養(yǎng)基, FBS濃度分別為0%,2.5%

2、,5%,7.5%,10%,并以濃度系數(shù)標記各組。取第4代BMSCs,利用MTT法在(1、3、5、7、9d)檢測細胞的增殖。分別取各組傳代到第4代BMCS,加入AngII和5-Aza(AngII0.1μmol/l和5-Aza10μmol/l)誘導劑誘導,24h后吸棄含有誘導劑的培養(yǎng)液,跟換新培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。取誘導后各組的第1代(yP1)細胞,使用MTT法檢測類心肌細胞在(1、3、5、7d)的生長活力,細胞免疫熒光化學染色法檢測誘導后培養(yǎng)至

3、第4周時各組中cTnI, Cx-43兩類心肌相關蛋白的表達情況,并計算其表達率。
  結(jié)果:
  1.在5種不同濃度FBS下的L-DMEM培養(yǎng)液均可獲得第4代 BMSCs;MTT檢測細胞活力(1、3、5、7、9d)結(jié)果顯示,5組不同體積分數(shù)的FBS培養(yǎng)液均可以促進 BMSCs的生長,10%組>2.5%,5%,7.5%組>0%組,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05),2.5%,5%,7.5%組組間比較,差異無統(tǒng)計學意義(p>0.0

4、5)。2.各組BMSCs在AngⅡ和5-Aza( AngⅡ0.1μmol/L、5-Aza10μmol/L)聯(lián)合作用誘導時,能分化為類心肌樣細胞。誘導后的細胞MTT檢測細胞活力顯示10%組>7.5%>5%,2.5%組>0%組(p<0.05),而5%,2.5%組比較未見明顯差異(p>0.05)。各組心肌樣細胞的蛋白的表達顯示10%組>7.5%>5%,2.5%組>0%組差別有統(tǒng)計學意義(p<0.05),而5%,2.5%組比較未見明顯差異,差異

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