牡丹皮炭質(zhì)量控制及代謝組學(xué)的初步研究.pdf

1、牡丹皮為毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosaAndr．的干燥根皮，味苦，辛，性微寒，具有清熱涼血，活血散瘀的功效，用于陰虛發(fā)熱，瘀血閉經(jīng)等。臨床上有清熱涼血活血化瘀功能，常用于熱入營血，溫毒發(fā)斑等癥，對(duì)于無汗骨蒸，經(jīng)閉，瘡毒也有一定的療效。牡丹皮炭為干燥根皮的炒炭品，其藥性寒，味酸辛，入心、肝、腎經(jīng)。具有涼血止血的作用，可用于吐血、崩漏及其它多種血熱出血證，牡丹制炭之后，其寒涼之性緩和，止血作用增強(qiáng)，常用于血熱出血等。

2、牡丹皮經(jīng)炒炭之后產(chǎn)生相反的作用：涼血活血→涼血止血，其功效的改變必然藥效成分及其體內(nèi)作用過程相關(guān)。故本項(xiàng)目從牡丹皮炭炮制工藝、質(zhì)量控制及其代謝組學(xué)方面進(jìn)行研究。
　　第一牡丹皮炭炮制工藝的研究。采用 Box-Behnken響應(yīng)面分析法優(yōu)化牡丹皮炭的最佳炮制工藝。炮制時(shí)，采用砂燙法，以沒食子酸、5-羥甲基糠醛、兒茶素、丹皮酚含量的加權(quán)評(píng)分為指標(biāo)，以炮制時(shí)間，炮制溫度，投料比做單因素實(shí)驗(yàn)，在此基礎(chǔ)上采用Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)

3、化牡丹皮炭炮制的最佳工藝。牡丹皮炭炮制的最佳工藝為：炮制時(shí)間為9.0 min，炮制溫度為180.0℃，投料比為25.5倍；四個(gè)成分含量加權(quán)評(píng)分響應(yīng)值的預(yù)測值為95.081，實(shí)測平均值為94.314，與預(yù)測值接近。
　　第二牡丹皮炭的質(zhì)量控制。通過應(yīng)用亞甲基藍(lán)色素吸附法和磷鉬鎢酸比色法對(duì)牡丹皮炭進(jìn)行測定，得到牡丹皮炭的色素對(duì)亞甲基藍(lán)的吸附力建議不得低于7.7 mg.g-1、鞣質(zhì)含量建議不低于0.81 mg.g-1。利用紫外譜線組法及

4、紫外譜線組的吸收峰數(shù)及峰位置對(duì)牡丹皮和牡丹皮炭不同炮制程度及其不同極性部位的紫外譜線圖譜進(jìn)行研究，結(jié)果牡丹皮及其炮制品的紫外譜線組的吸收峰、峰位及吸收度具有明顯差異。通過應(yīng)用HPLC法測定牡丹皮及其不同炮制程度炭藥中的5-羥甲基糠醛，沒食子酸，兒茶素，丹皮酚的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，沒食子酸和5-羥甲基糠醛的含量隨炮制時(shí)間延長而增加，但一定程度后開始下降；兒茶素和丹皮酚的含量則下降。
　　第三牡丹皮炭給藥后的血清代謝物的1H-NMR代謝組

5、學(xué)研究。采用核磁共振( NMR)技術(shù)對(duì)人體的血清進(jìn)行測試分析，應(yīng)用偏最小二乘判別分析法(PLS-DA)研究比較正常人體服用牡丹皮炭前后血清之間的代謝譜差異，通過比較代謝物的差異。發(fā)現(xiàn)正常人體服用牡丹皮炭前后的血清在1H-NMR中出現(xiàn)的特征峰有明顯差異，為牡丹皮炭在人體的作用機(jī)制及臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。
　　第四牡丹皮炭對(duì)血熱出血大鼠的血清、尿液的代謝組學(xué)的研究。采用乙醇灌胃/自由飲用結(jié)合皮下注射干酵母造成血熱出血大鼠模型。取血清

6、和尿液進(jìn)行1H-NMR分析測定，選擇PLS-DA對(duì)大鼠尿液、血清的內(nèi)源性代謝物質(zhì)進(jìn)行分析。通過變量重要性投影（VIP）和矯正率篩選出牡丹皮炭涼血止血的藥效生物標(biāo)志物，初步篩選出與血熱出血癥相關(guān)的生物標(biāo)志物有其中3-羥基丁酸、乙酰乙酸、肌酸、乳酸、丙氨酸、?；撬?、甘氨酸、膽堿、色氨酸、葡萄糖、甲酸、絡(luò)氨酸、二甲基色胺、天冬氨酸等為牡丹皮炭涼血經(jīng)止血的藥效生物標(biāo)志物。牡丹皮炭可顯著影響血熱出血的大鼠尿液、血清的相關(guān)物質(zhì)的代謝作用，為進(jìn)一步闡