牡丹皮及其炮制品HPLC指紋圖譜建立及質(zhì)量控制研究.pdf

1、牡丹皮為毛莨科芍藥屬植物牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.）干燥根皮?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》中記載“牡丹皮主寒熱，中風瘛疭、痙、驚癇邪氣，除癥堅淤血留舍腸胃，安五臟，療癰瘡[1]”。由《中國藥典》（2010版）“清熱涼血，活血化瘀，用于熱人營血，溫毒發(fā)斑，吐血衄血，夜熱早涼，無汗骨蒸，經(jīng)閉痛經(jīng)，跌撲傷痛，癰腫瘡毒。”相反牡丹皮炭品的藥效與牡丹皮藥材療效相反，從最早有文字記載制炭藥物的文獻《五十二病方》至今，炭藥的應用已有

2、兩千多年的歷史。據(jù)古代文獻金元醫(yī)家以“十灰散”治癆癥咯血、吐血，牡丹皮炭品屬于寒涼藥作為其中主要成分之一，創(chuàng)“血冷則凝，見黑則止”[2]。
　　牡丹皮是“炒炭存性”、“一物兩性”的典型代表，藥物功效的改變主要是藥效物質(zhì)基礎的變化，通過不同炮制方法使藥物中的化學成分發(fā)生了不同變化。藥材及藥材炮制品的質(zhì)量對藥物的臨床療效有重要影響主要包括藥材生品的產(chǎn)地、藥材公司的加工方法、藥材炮制方法。因藥材飲片公司及藥材加工廠的藥材炮制主要靠炮制經(jīng)

3、驗未有相對統(tǒng)一具體的炮制工藝，導致不同飲片具有質(zhì)量差異。近幾年來國內(nèi)外對牡丹皮及牡丹皮炮制品的質(zhì)量評價標準不外乎是從外觀及單一化學成分的含量，然而外觀性狀來判斷具有主觀性，而單一化學成分的含量測定不能完整準確的反應藥材的質(zhì)量和臨床療效。故本課題根據(jù)多方文獻資料及預實驗結(jié)果采用多指標對牡丹皮及牡丹皮炭的進行定性分析及對其質(zhì)量控制指標進行初步探討，同時建立牡丹皮及其炭品指紋圖譜的共有模式，并采用HPLC法測定10個化學成分含量，并以此為標準

4、對不同產(chǎn)地、不同炮制程度的藥材進行分析比較，初步探討了牡丹皮炭品止血機理為后續(xù)深入研究奠定基礎。
　　第一指紋圖譜色譜條件的篩選，通過對藥材提取方法，流動相、HPLC儀器溫度、波長、流速等方面的實驗結(jié)果得出牡丹皮及其炮制品用50％甲醇超聲提取90 min，采用流動相乙腈：0.1%甲酸-水，柱溫30℃，流速為1.0 ml.min-1，在254 nm下進行梯度洗脫，得出的HPLC指紋圖譜峰形較好分離度良好。采用上述色譜條件分別建立牡丹

5、皮生品、牡丹皮炭品的高效液相指紋圖譜，并比較不同產(chǎn)地的生品及炮制品指紋圖譜差異，實驗結(jié)果得出牡丹皮共有模式具有較高相似度均在0.930以上；牡丹皮炭品共有模式也具有較高相似度均在0.950以上；分別比較不同產(chǎn)地牡丹皮及其炮制品的相似度值良好但有個別差異；比較牡丹皮生品及炭品的相似度較差，通過與標準品的對比大致確定了牡丹皮10個主要化學成分并從指紋圖譜比較中得出炮制過程中丹皮酚、芍藥苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、槲皮素、山奈素、異鼠李素的

6、峰面積隨炮制程度的增加而顯著下降，而化合物沒食子酸峰面積增加，但炮制程度太過時峰面積顯著降低，并有新成分鞣質(zhì)5-羥甲基糠醛生成。
　　第二測定牡丹皮及其炭品的含量，通過HPLC方法構(gòu)建10個不同類別化學成分的含量測定方法。通過方法學考察實驗得出10個化學成分具有良好精密度RSD均小于2.0%；重復性實驗10個成分具有良好重復性RSD均小于3.0%；且加樣回收率良好均在95%-105%之間，故采用上述方法分別對牡丹皮及其炭品進行10

7、個成分含量測定。結(jié)果表明炮制后兒茶素、丹皮酚、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、槲皮素、異鼠李素、山奈素含量顯著降低，而沒食子酸的含量隨之增加并有新生化合物5-羥甲基糠醛。并通過PCA主成分分析結(jié)果得出牡丹皮生品與炭品形成兩個明顯獨立區(qū)域，表明炮制前后化學成分含量明顯變化；5-HMF、沒食子酸、槲皮素含量變化成為影響區(qū)別的主要因素。
　　第三不同產(chǎn)地及不同炮制程度含量測定比較不同炮制品、不同產(chǎn)地、不同炮制程度的10個化學成分的含量，實驗結(jié)