白術(shù)不同炮制品指紋圖譜的研究.pdf

1、研究背景：
　　 白術(shù)為菊科植物白術(shù)Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根莖。氣清香,味苦、甘,性溫,具健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎之功效。主要用于脾虛食少、腹脹泄瀉、痰飲眩悸、水腫、自汗、胎動(dòng)不安。白術(shù)主要含有白術(shù)內(nèi)酯、揮發(fā)油等多種化學(xué)成分。傳統(tǒng)認(rèn)為白術(shù)生品燥濕力強(qiáng),炮制后可緩和藥性,增強(qiáng)健脾和胃、補(bǔ)脾止瀉的功效?，F(xiàn)臨床生用以健脾燥濕、利水消腫為主,多用于痰飲、水腫以及風(fēng)濕痹痛,常配伍方“五

2、苓散”,“苓桂術(shù)甘湯”,“白術(shù)附子湯”等；麩炒白術(shù)緩和燥性,增強(qiáng)健脾、除脹作用,用于脾胃不和、運(yùn)化失常,食少脹滿倦怠乏力,表虛自汗,如“枳術(shù)丸”、“補(bǔ)中益氣湯”,“玉屏風(fēng)散”等；土炒則補(bǔ)脾止瀉力強(qiáng),多用于脾虛食少,泄瀉便溏,胎動(dòng)不安,如“理中丸”、“附子理中丸”等。白術(shù)不同炮制品功效各異,根源是其內(nèi)在化學(xué)成分在成分組成和量比關(guān)系上發(fā)生了變化。
　　 中藥指紋圖譜能比較全面的反映中藥的整體化學(xué)特征,體現(xiàn)其內(nèi)在的整體質(zhì)量,彌補(bǔ)過去對(duì)

3、中藥質(zhì)量控制只對(duì)少數(shù)成分控制質(zhì)量的弊端,是一種更為合理的中藥質(zhì)量控制模式。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局于2000年頒布了《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》,規(guī)范了對(duì)中藥指紋圖譜的研究,促進(jìn)了國(guó)內(nèi)對(duì)中藥指紋圖譜的研究,其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)已得到了越來(lái)越多的認(rèn)可。為全面、有效的控制白術(shù)不同飲片的質(zhì)量,采用高效液相色譜(HPLC)法和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)法對(duì)白術(shù)不同炮制飲片的指紋圖譜進(jìn)行研究,為其不同飲片的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù),并為揭示

4、炮制改變白術(shù)藥性的科學(xué)內(nèi)涵奠定基礎(chǔ)。
　　 目的：
　　 以HPLC法和GC-MS法建立白術(shù)不同炮制飲片白術(shù)、麩炒白術(shù)、土炒白術(shù)、清炒白術(shù)、焦白術(shù)的指紋圖譜測(cè)定方法,并比較不同炮制飲片指紋圖譜的差異性,并對(duì)不同炮制飲片作相似度分析。為白術(shù)的不同炮制品規(guī)范炮制工藝、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)化和進(jìn)一步的應(yīng)用開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法
　　 1.白術(shù)不同炮制品HPLC指紋圖譜的研究
　　 色譜條件:采用Krom

5、asil C18(250mm×4.6mm,5 μ m)柱,二極管陣列檢測(cè)器(DAD),以乙腈(A)-水(B)為流動(dòng)相梯度洗脫。流速1mL·min-1,柱溫25℃,檢測(cè)波長(zhǎng)242nm;進(jìn)樣量為10 μ L。在此條件下進(jìn)行方法學(xué)考察后,對(duì)麩炒白術(shù)、土炒白術(shù)、清炒白術(shù)及焦白術(shù)進(jìn)行HPLC指紋圖譜測(cè)定,比較炮制前后指紋圖譜的變化。
　　 2.白術(shù)不同炮制品揮發(fā)油的GC-MS指紋圖譜的研究
　　 色譜條件:采用DB-5MS石英毛細(xì)

6、管柱(30m×250 μ m×0.25 μ m)；進(jìn)樣量1.0 μ l；分流進(jìn)樣,分流比5:1；進(jìn)樣口溫度250℃；載氣He;載氣模式:恒流,流速1ml·min-1,平均線速37cm/sec；升溫條件:初始溫度100℃,以3℃·min-1升至130℃,保持10min；再以6℃·min-1升至250℃。氣質(zhì)接口溫度:280℃。
　　 質(zhì)譜條件:離子源溫度:230℃,四級(jí)桿溫度:150℃,電離電壓:1906V,電離能量:70eV,質(zhì)

7、量掃描范圍:30-450amu。數(shù)據(jù)庫(kù):NIST05、WILEY275數(shù)據(jù)庫(kù)。
　　 用不同炮制方法對(duì)凈制后的白術(shù)飲片分別進(jìn)行土炒、麩炒、清炒和炒焦,采用水蒸氣蒸餾法從炒制品中提取揮發(fā)油,在上述色譜條件下對(duì)各樣品揮發(fā)油進(jìn)行GC-MS測(cè)定,建立不同炮制飲片揮發(fā)油的指紋圖譜并比較炮制前后指紋圖譜的變化。
　　 結(jié)果
　　 1、白術(shù)不同炮制飲片HPLC指紋圖譜測(cè)定
　　 分別測(cè)定了10批白術(shù)、麩炒白術(shù)、土炒白術(shù)

8、、清炒白術(shù)及焦白術(shù)的HPLC指紋圖譜,從中標(biāo)定了17個(gè)共有峰。不同炮制品間峰貌相似,相似度評(píng)價(jià)均大于0.9,整體相似度較好,初步建立了白術(shù)不同炮制品的共有峰模式。各炮制品中各共有峰基本存在,保留時(shí)間與相對(duì)保留時(shí)間基本一致,但共有峰強(qiáng)度差別較大。同一批次白術(shù)經(jīng)土炒和炒焦后,共有峰相對(duì)峰面積變化較大,清炒和麩炒制后的共有峰相對(duì)峰面積變化較小。
　　 2、白術(shù)不同炮制飲片揮發(fā)油GC-MS指紋圖譜測(cè)定
　　 10個(gè)批次白術(shù)不同炮

9、制飲片揮發(fā)油的特征成分均為γ-丁香烯、β-丁香烯、γ-欖香烯、α-蛇麻烯、β-桉葉烯、α-古蕓烯、δ-雪松烯、大根香葉烯B、4,5-脫氫異長(zhǎng)葉烯、β-朱欒、蒼術(shù)酮、α-桉葉醇、杜松腦、6,7-二氫甲氧呋豆素、異匙葉桉油烯醇、Selina-3,7(11)-diene、油酸,這17種成分的相對(duì)含量約占揮發(fā)油總成分的85.5％～98.2％,不同炮制品揮發(fā)油成分相對(duì)峰面積有所差異,其峰面積和保留時(shí)間形成了特征性指紋圖譜。
　　 結(jié)論