眼局部應(yīng)用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)治療干眼的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討眼局部應(yīng)用BMSC對(duì)干眼小鼠的治療作用及其機(jī)制，并比較BMSC點(diǎn)眼與眼眶注射兩種不同應(yīng)用途徑的療效差異。
　　方法：收集BALB/c小鼠雙側(cè)股骨、脛骨骨髓，采用貼壁培養(yǎng)法純化BALB/c小鼠BMSC。采用隨機(jī)數(shù)字表法將35只健康6-8周齡BALB/c小鼠分為正常對(duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組、BMSC點(diǎn)眼組、BMSC眼眶注射組，每組7只，除正常對(duì)照組外的28只小鼠使用0.25％苯扎氯銨溶液滴雙眼，連續(xù)滴21天，建立中重度干眼

2、的動(dòng)物模型。造模結(jié)束后開始治療，模型組給予磷酸鹽緩沖液（PBS）滴雙眼；陽性對(duì)照組給予普拉洛芬眼液滴雙眼；BMSC點(diǎn)眼組給予含1x105BMSC PBS懸垂液滴雙眼；BMSC眼眶注射組給予含1x105 BMSC PBS懸垂液分別于治療當(dāng)天、第4天注射。治療的第8天檢測(cè)并比較各組小鼠眼表炎癥指數(shù)、淚液分泌試驗(yàn)（SⅠt）、淚膜破裂時(shí)間(BUT)、角膜熒光染色評(píng)分結(jié)果。第9天麻藥過量法處死35只小鼠，隨機(jī)選取每組5眼用以制備蘇木精-伊紅（HE

3、）染色、過碘酸-希夫（PAS）染色切片，行眼表組織病理學(xué)觀察，并進(jìn)行杯狀細(xì)胞計(jì)數(shù)；4眼用以制備冰凍切片，觀察有無PK67標(biāo)記的異體BMSC在眼表組織遷移，5眼用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定小鼠眼表組織中白細(xì)胞介素-10(IL-10)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)蛋白含量。
　　結(jié)果：模型組眼表炎癥指數(shù)0.31±0.05、FLS評(píng)分8.80±1.21分別高于正常對(duì)照組0.01±0.01、0.14±0.14，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；

4、而陽性對(duì)照組、BMSC點(diǎn)眼組、BMSC眼眶注射組炎癥指數(shù)分別為0.15±0.03、0.18±0.03、0.06±0.02均明顯低于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且BMSC眼眶注射組低于BMSC點(diǎn)眼組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；僅BMSC眼眶注射組FLS評(píng)分3.93±0.74明顯低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組SIt（4.00±0.39）mm明顯少于正常對(duì)照組（6.36±0.48）mm，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而BMSC眼眶注射組SIt（5.86±0

5、.54）mm明顯多于模型組、陽性對(duì)照組（3.92±0.38）mm、BMSC點(diǎn)眼組（3.90±0.31）mm，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組BUT（3.00±0.21）s較正常對(duì)照組（6.00±0.21）s明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而陽性對(duì)照組（4.20±0.29）s、BMSC點(diǎn)眼組（4.40±0.27）s、BMSC眼眶注射組（4.79±0.02）s均較模型組明顯延長(zhǎng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；眼表組織HE染色:模型組角膜上皮細(xì)胞腫脹、大量炎性細(xì)

6、胞浸潤(rùn)，基質(zhì)層膠原纖維排列紊亂、腫脹，BMSC點(diǎn)眼及注射組角膜上皮表面平整，基質(zhì)層膠原纖維排列緊密形態(tài)接近正常小鼠，兩組間無明顯差異。PAS染色BMSC注射組(13.80±2.48)個(gè)與陽性對(duì)照組(13.17±2.09)個(gè)杯狀細(xì)胞數(shù)量相當(dāng)，均多于模型組(5.20±1.07)個(gè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。冰凍切片：在BMSC點(diǎn)眼組及BMSC眼眶注射組瞼板、結(jié)膜下及角膜均未見帶PKH67標(biāo)記的BMSC。ELISA BMSC注射組IL-10蛋白含量(