多沙唑嗪的SPE-LC-MS-MS分析方法建立及其在大鼠體內代謝的研究.pdf

1、多沙唑嗪中文全稱為甲磺酸多沙唑嗪（DOX）屬喹啉類高選擇性α1腎上腺素受體阻斷劑，是臨床上用于治療良性前列腺增生合并下尿路癥狀的一線藥物，也是高血壓治療推薦方案中的常用添加藥物。多沙唑嗪分子結構中存在一個手性碳原子，為手性藥物，臨床應用其消旋體（由等量左旋多沙唑嗪和右旋多沙唑嗪組成）。動物實驗研究表明，兩個對映體在藥代動力學、藥理作用和毒性作用方面有明顯的手性差異；在治療良性前列腺增生方面，左旋多沙唑嗪可能具有一定的優(yōu)勢。
　　眾

2、所周知，藥物的效應與血液中藥物的濃度有密切關系，多沙唑嗪亦是如此。研究表明生物體內多沙唑嗪作為α1受體阻斷劑的藥理作用與血中多沙唑嗪的濃度有直接關系。另外，血藥濃度監(jiān)測可以為臨床合理、安全用藥提供依據(jù)。隨著儀器分析技術的發(fā)展，越來越多的新技術被用于藥物血藥濃度的檢測，推動了體內藥代動力學的發(fā)展。尤為重要的是質譜技術的發(fā)展，為藥物代謝動力學及代謝組學的發(fā)展奠定了基礎。
　　生物樣品中多沙唑嗪的含量測定，多采用HPLC-UVD、HPL

3、C-FLD、HPLC-MS方法，但最低定量限均未超過0.1 ng·mL/1。然而，對于多沙唑嗪藥代動力學研究需要更低的血藥濃度和更靈敏的多沙唑嗪血藥濃度檢測方法。本文建立了大鼠血漿左旋多沙唑嗪微量檢測的SPE-LC-MS/MS方法，最低定量限為10.4 pg·mL/1，該法同樣適用于右旋多沙唑嗪及消旋多沙唑嗪生物樣本的檢測。同時，采用 LC-MS/MS法對消旋多沙唑嗪靜脈注射后在大鼠體內的藥代動力學及代謝產物進行了研究。
　　第一

4、部分大鼠血漿中左旋多沙唑嗪SPE-LC-MS/MS分析方法的建立
　　目的：目前多沙唑嗪及其對映體的生物樣本最低定量限未超過0.1 ng·mL/1，本研究建立了一種新的大鼠血漿左旋多沙唑嗪微量檢測的液相色譜-串聯(lián)質譜（LC-MS/MS）方法。
　　方法：血漿樣本加入內標哌唑嗪后經 C18固相萃取小柱萃取，堿性條件下采用ACQUITY BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7μm）色譜柱進行分離，流速為0.45 mL·

5、min/1。在正離子模式下以MRM（多反應離子監(jiān)測）方式測定左旋多沙唑嗪的含量。
　　結果：左旋多沙唑嗪和內標物分離良好，保留時間分別為0.47和0.35 min，且血漿中內源性物質不干擾左旋多沙唑嗪及內標物的測定。左旋多沙唑嗪在10.4 pg·mL-1~13 ng·mL-1范圍內線性關系良好，最低定量限為10.4 pg·mL-1。采用提取后加入法及柱后灌注法評價左旋多沙唑嗪血漿樣本的基質效應，不存在明顯的基質效應。應用本法可測定

6、大鼠尾靜脈注射左旋多沙唑嗪（3 mg·kg-1）48 h后的血藥濃度，結果為0.0344±0.0102 ng·mL-1。
　　結論：所建立的SPE-LC-MS/MS分析方法特異性強，靈敏度高，適用于左旋多沙唑嗪的血藥濃度測定，也為其他藥物血藥濃度的分析提供了參考。
　　第二部分大鼠靜脈注射消旋多沙唑嗪的藥代動力學及其代謝產物研究
　　目的：研究大鼠靜脈注射消旋多沙唑嗪的藥代動力學，采用LC-MSn方法鑒定大鼠體內消旋多

7、沙唑嗪的代謝產物。
　　方法：消旋多沙唑嗪藥代動力學研究：取SD大鼠6只，靜脈注射消旋多沙唑嗪溶液（0.686 mg·kg-1）后，于給藥后不同時間用肝素化毛細管經大鼠眼底靜脈叢取血，血樣采集時間為72 h。采用液液萃取法進行血漿樣品預處理，萃取溶液為正己烷-乙酸乙酯（1:1 v/v）混合溶液。應用高靈敏度的UPLC-MS/MS方法測定每一受試動物各取血點的血藥濃度。色譜條件：Hypersil Gold C18（100 mm×2.

8、1 mm，1.9μm）色譜柱，柱溫35℃；流動相乙腈-0.1％甲酸水溶液，梯度洗脫方式；流速0.35 mL·min-1。WinNonlin5.1軟件進行藥時曲線擬合，并采用靜脈單次給藥及雙房室模型計算消旋多沙唑嗪藥代動力學參數(shù)。消旋多沙唑嗪代謝產物研究：用高分辨質譜 Orbitrap Fusion技術對消旋多沙唑嗪在大鼠體內的代謝產物進行鑒定。
　　結果：采用雙房室模型計算大鼠靜脈注射消旋多沙唑嗪的藥代動力學參數(shù)，消旋多沙唑嗪的主

9、要藥代動力學參數(shù) t1/2β為（1.44±0.27）h， AUC0-t為（403.63±50.88）h·ng·mL-1，其中t1/2β與本實驗室前期研究結果t1/2β（1.41±0.15）h基本一致。共檢測到9個代謝產物：3個單羥基化產物、1個氧去甲基產物、1個哌嗪環(huán)羥基化后脫水產物，此外還發(fā)現(xiàn)了M4(m/z451.1612)、M5(m/z470.2034)、M6(m/z466.1721)、M7(m/z422.1459)產物。其中羥基化

10、、氧去甲基、哌嗪環(huán)羥基化后脫水產物已有報道；M4-M7為首次發(fā)現(xiàn)。原形藥消旋多沙唑嗪經過哌嗪環(huán)羥基化后脫水、羥基化和脫氨基反應生成M4；苯并二噁烷環(huán)羥基化后開環(huán)生成M5；哌嗪環(huán)羥基化后脫水和羥基化反應生成M6；哌嗪環(huán)羥基化后脫水和氧去甲基反應生成M7。
　　結論：延長血漿樣本采集時間至48 h時，大鼠體內消旋多沙唑嗪消除半衰期與文獻報道一致；同時在大鼠體內發(fā)現(xiàn)了未曾報道的4個可能的代謝產物（M4-M7），其代謝修飾過程比已知代謝物