尿液中快速甄別海洛因?yàn)E用者的SPE-LC-MS-MS檢測(cè)方法研究.pdf

1、目的: 1．建立尿液中嗎啡類(lèi)藥物的固相萃取/液相色譜—串級(jí)質(zhì)譜(SPE/LC—MS/MS)方法； 2．建立快速甄別海洛因?yàn)E用者的LC—MS/MS定性方法； 3．通過(guò)尿液檢測(cè)研究服用含有嗎啡、可待因的鎮(zhèn)咳藥物、食用含罌粟殼作料的食物和海洛因?yàn)E用者尿液中嗎啡類(lèi)藥物的代謝規(guī)律； 4．在嗎啡膠體金檢測(cè)陽(yáng)性的情況下，尋找吸食嗎啡類(lèi)毒品(海洛因、嗎啡、阿片)者、服用法律允許藥物(鎮(zhèn)咳藥、止痛藥)者及食用添加罌粟殼作料

2、的食物者尿液中嗎啡類(lèi)代謝物之間的關(guān)系。 方法: 1．嗎啡類(lèi)藥物固相萃取方法的研究：采用Waters OASIS(R)MCX 3cc(60mg)固相萃取柱進(jìn)行提取，分析了不同pH值條件、不同洗滌劑、不同洗脫溶劑對(duì)嗎啡類(lèi)藥物固相萃取回收率的影響，優(yōu)化了自動(dòng)固相萃取方法。 2．嗎啡類(lèi)藥物L(fēng)C—MS/MS檢測(cè)方法條件優(yōu)化的研究：采用保留時(shí)間(Rt)和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)方式來(lái)對(duì)尿液中嗎啡類(lèi)藥物及其代謝物進(jìn)行定性定量分析。

3、 3．嗎啡類(lèi)藥物代謝規(guī)律的研究。 3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：健康志愿者26人，隨機(jī)分為三個(gè)實(shí)驗(yàn)組： 3.1.1 第一組服用復(fù)方甘草片藥物組(10人)，A：2人多次服用，每次3片，3次/日，連續(xù)服用三日；B：8人單次服藥，單次服用復(fù)方甘草片4片。 3.1.2 第二組服用可愈糖漿組(8人)：?jiǎn)未畏?0ml可愈糖漿。 3.1.3 第三組服用添加罌粟殼作料火鍋組(8人)：食用添加罌粟殼作料的火鍋食物。

4、3.2 樣品采集與保存：志愿者服藥前半小時(shí)留取尿液作為空白對(duì)照，服藥后分別于0.5h，1.0h，1.5h，2.0h，2.5h，3.0h，3.5h，4.0h，6.0h…46.0h，48.0h留取尿液，并于-20℃條件保存。 3.3 樣品前處理及自動(dòng)固相萃取(SPE)法：尿液樣品解凍，取3ml放入試管，4000r/min×3min離心，取上清液2ml轉(zhuǎn)移至另一試管中，加入pH4.0磷酸鹽緩沖液4ml備用，應(yīng)用建立的全自動(dòng)固相萃取法提

5、取尿液。 3.4 LC—MS/MS方法檢測(cè)：采用保留時(shí)間和選擇2-3對(duì)離子定性，以1對(duì)響應(yīng)值相對(duì)較高的特征離子的峰面積與其溶液濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線，用外標(biāo)法進(jìn)行定量。 4．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：處理數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(—X±S)表示。 結(jié)果: 1．在磷酸鹽緩沖液pH4.0時(shí)，海洛因、O6—單乙?；鶈岱?6—MAM)、可待因、嗎啡、3—β-d—葡萄糖醛酸嗎啡(M3G)、葡萄糖醛酸可待因(C

6、6G)、罌粟堿、蒂巴因、那可汀、納萃因的固相萃取回收率較高，平均回收率分別為66.52％，109.51％，99.18％，78.47％，101.92％，91.62％，88.88％，76.09％，88.35％，91.36％。 2．LC—MS/MS方法：生物樣本中嗎啡類(lèi)藥物通過(guò)多離子監(jiān)測(cè)(MRM)方式可以得到較好的分離，靈敏度高。海洛因、6—MAM、可待因、嗎啡、M3G、C6G、罌粟堿、蒂巴因、那可汀及納萃因在0.01μg/ml～10

7、.0μg/ml范圍呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2分別為0.9997、0.9994、0.9992、0.9958、0.9998、0.9982、0.9999、0.9948、0.9999、0.9967，最低檢測(cè)限(LOD)分別為2pg、5pg、5pg、10pg、5pg、0.2pg、0.5pg、10pg、5pg、10pg。 3．服用鎮(zhèn)咳藥物者的尿液分析結(jié)果：服用含鴉片的鎮(zhèn)咳藥物如復(fù)方甘草片者尿液中檢測(cè)出嗎啡、可待因、M3G和C6G等嗎啡

8、類(lèi)藥物成分，在0.5～3.0h濃度達(dá)到高峰，嗎啡/可待因峰面積比值(Mor/Cod)：1.61±0.67≤Mor/Cod＜3.07±1.85；服用含可待因的鎮(zhèn)咳藥物者尿液中檢測(cè)出嗎啡、可待因、M3G、C6G等嗎啡類(lèi)藥物成分，在0.5～3h濃度達(dá)到高峰，0.09±0.07≤Mor/Cod＜0.24±0.12。 4．食用添加罌粟殼作料火鍋者的尿液分析結(jié)果：尿液分析檢測(cè)出嗎啡、可待因、M3G和C6G等嗎啡類(lèi)藥物成分，在0.5～3h濃度

9、達(dá)到高峰，2.48±2.08≤Mor/Cod＜6.41±2.65，且有時(shí)可檢測(cè)出罌粟堿、那可汀、蒂巴因及納萃因等物質(zhì)。 5．海洛因?yàn)E用者尿液分析結(jié)果：6—MAM在一定時(shí)間內(nèi)可測(cè)出，有的還可以檢測(cè)到海洛因或乙酰可待因原形物質(zhì)，162個(gè)尿樣中有90例檢出6—MAM，90例中除9例尿樣Mor/Cod比值小于1且9例均檢測(cè)出6—MAM外，其余均大于1。 結(jié)論: 1．本文建立的尿液中嗎啡類(lèi)藥物的固相萃取/LC—MS/MS檢

10、測(cè)方法，回收率高，靈敏度高，可以用于快速檢測(cè)生物檢材中的嗎啡類(lèi)藥物。 2．海洛因?yàn)E用者尿液分析：檢測(cè)到海洛因、乙酰可待因原形物質(zhì)或6—MAM任一成分可以確定吸食或注射海洛因；但是當(dāng)檢材中僅檢測(cè)到嗎啡、可待因、M3G及C6G時(shí)，需要考慮Mor/Cod比值。 3．海洛因?yàn)E用者和服用復(fù)方甘草片者尿液比較分析：尿液中均檢測(cè)出嗎啡、可待因及其葡萄糖醛酸化合物等成分，未檢測(cè)到6—MAM、海洛因或乙酰可待因時(shí)，尿液中Mor/Cod＞1

11、仍無(wú)法確定是否吸食或注射過(guò)海洛因，此時(shí)通過(guò)陰離子檢測(cè)模式檢測(cè)尿液中有無(wú)甘草次酸，若檢測(cè)到甘草次酸，可以初步判定嫌疑人近期服用過(guò)復(fù)方甘草片。 4．海洛因?yàn)E用者和服用可愈糖漿者尿液比較分析：尿液中檢測(cè)出0.09+0.07≤Mor/Cod＜0.24±0.12，可以判定嫌疑人服用過(guò)含可待因較多的鎮(zhèn)咳藥如可愈糖漿；Mor/Cod＜1且檢測(cè)到6—MAM時(shí)，為海洛因?yàn)E用者。 5．海洛因?yàn)E用者和食用添加罌粟殼作料火鍋者尿液比較分析：食用