miR-497-5p下調(diào)IKCa1基因表達(dá)對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、西南醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中圖分類號(hào)：中圖分類號(hào)：R737.33碩士學(xué)位論文miRmiR4974975p5p下調(diào)下調(diào)IKCa1IKCa1基因表達(dá)對(duì)基因表達(dá)對(duì)宮頸癌宮頸癌HelaHela細(xì)胞細(xì)胞增殖增殖的影響的影響院（系）、所院（系）、所臨床醫(yī)學(xué)院研究生姓名研究生姓名張君學(xué)科、專學(xué)科、專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)導(dǎo)師姓導(dǎo)師姓名毛熙光學(xué)位類型科學(xué)學(xué)位二〇一〇一七年三月年三月西南醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文miRmiR4974975p5p下調(diào)下調(diào)IKCa1IKCa1基

2、因表達(dá)對(duì)基因表達(dá)對(duì)宮頸癌宮頸癌HelaHela細(xì)胞細(xì)胞增殖增殖的影響的影響摘要目的：目的：IKCa1基因在宮頸癌中呈高表達(dá)，影響宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖和凋亡[1]。本實(shí)驗(yàn)的主要目的是通過(guò)生物信息學(xué)在線軟件對(duì)IKCa1基因進(jìn)行miRNA預(yù)測(cè)，探討候選miRNA在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)IKCa1基因的調(diào)控作用，并檢測(cè)候選miRNA過(guò)表達(dá)后對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖活性的影響。方法方法:1.利用生物信息學(xué)在線軟件starBaseV2.0進(jìn)行IKCa1基

3、因上游miRNA預(yù)測(cè)，通過(guò)文獻(xiàn)查閱，并選定其中一個(gè)作為研究對(duì)象。2.為了檢驗(yàn)候選miRNA能否直接作用于IKCa1mRNA3’UTR采用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)候選的miRNA與IKCa1mRNA3’UTR相互作用對(duì)熒光素酶活性的影響。3.確認(rèn)候選miRNA能夠靶向調(diào)控IKCa1基因后，對(duì)Hela細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，應(yīng)用PCR技術(shù)和Westernbolt法檢測(cè)IKCa1mRNA和蛋白表達(dá)水平，檢驗(yàn)候選miRNA在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)IKCa1基

4、因表達(dá)的影響。4.采用CCK8法檢測(cè)候選miRNA對(duì)Hela細(xì)胞增殖活性的影響。結(jié)果：結(jié)果：1.在生物信息學(xué)軟件starBaseV2.0所預(yù)測(cè)的miRNAs中，通過(guò)文獻(xiàn)查閱后，選定miR4975p作為研究對(duì)象進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果顯示miR4975pmimics和IKCa1wt共轉(zhuǎn)染組Hela細(xì)胞的熒光素酶活性顯著降低。3.PCR結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR4975pmimics的Hela細(xì)胞中IKCa1mRNA表