黑米花色苷抗應(yīng)激性肝、腎組織毒性作用及黑老虎果花色苷成分的研究.pdf

1、花色苷是廣泛分布于自然界中的多酚類色素,是植物呈現(xiàn)絢麗色彩的主要來源,具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等藥理活性。本論文分兩部分從不同角度對黑米、黑老虎果中的花色苷成分進行研究。第一,首次研究了黑米花色苷提取物對溴酸鉀(KBrO3)誘發(fā)的小鼠應(yīng)激性腎組織毒性和拘束誘發(fā)的小鼠應(yīng)激性肝組織毒性的影響。第二,首次對黑老虎果中的花色苷成分進行鑒定與含量測定,并且,研究了其主花色苷的pH、熱穩(wěn)定性及抗氧化活性。
　　在第一部分實驗中,利用UPLC/

2、Q-TOF-MS對黑米花色苷提取物中的花色苷成分進行定性分析,采用 HPLC法對提取物中的花色苷成分進行定量分析,并運用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)與2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)法評價了黑米花色苷提取物的體外抗氧化能力。通過腹腔注射 KBrO3誘導(dǎo)小鼠氧化應(yīng)激性腎組織毒性,小鼠的血清肌酐(Cr)含量的測定采用HPLC法。小鼠的血清尿素氮(BUN)、腎組織丙二醛(MDA)、黃嘌呤氧化酶(XOD

3、)和一氧化氮(NO)含量的測定采用比色法。并測定了黑米花色苷提取物給藥后上述各指標的變化情況。通過拘束負荷誘發(fā)小鼠應(yīng)激性肝組織毒性,小鼠的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)含量的測定采用賴氏法,肝組織谷胱甘肽(GSH)含量的測定采用分光光度法。并測定了黑米花色苷提取物給藥后上述各指標的變化情況。結(jié)果,在黑米花色苷提取物中共檢測到9種花色苷,鑒定了其中的8種分別是,cyanidin-3,5-diglucoside、cyanidin-3-gentio

4、bioside、 cyanidin-3-glucoside、cyanidin-3-sambubioside、cyanidin-3-rutinoside、peonidin-3-glucoside、cyanidin和peonidin,其總含量為41.69％(相當于cyanidin-3-glucoside)。DPPH和ABTS自由基清除實驗結(jié)果表明,黑米花色苷提取物顯示出與Vc相近的體外抗氧化活性。腹腔注射溴酸鉀9 h后可誘發(fā)小鼠嚴重的腎組織

5、毒性:小鼠的血清Cr和BUN含量顯著升高,腎組織XOD、MDA和NO含量顯著升高。黑米花色苷提取物能夠有效降低小鼠的血清Cr和BUN含量,同時可以降低腎組織XOD、MDA和NO含量,改善小鼠的腎組織毒性程度。拘束12 h后,血清 GPT含量顯著升高,表明拘束負荷誘發(fā)了小鼠嚴重的肝組織毒性。黑米花色苷提取物能夠有效降低肝毒性小鼠的血清 GPT含量,并可降低肝組織過高的XOD、MDA和NO含量,恢復(fù)肝組織GSH含量,改善小鼠的肝組織毒性程度

6、。結(jié)果表明,黑米花色苷提取物是通過清除體內(nèi)的自由基,改善機體的氧化應(yīng)激狀態(tài),對KBrO3誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激性腎毒性和拘束誘發(fā)的應(yīng)激性肝毒性發(fā)揮保護作用的。
　　在第二部分實驗中,首先用1％HCl-甲醇對黑老虎果中的花色苷成分進行提取,通過UPLC/Q-TOF-MS對提取物中的各花色苷成分進行鑒定,運用HPLC對各花色苷成分的含量進行測定。然后,對其主花色苷成分進行分離,用于研究其 pH、熱穩(wěn)定性以及抗氧化活性。pH和熱穩(wěn)定性的研究分別

7、采用分光光度法和HPLC法。抗氧化活性的研究采用DPPH和ABTS自由基清除法。結(jié)果表明,黑老虎果中共存在4種花色苷分別是,delphinidin-3-xylosylrutinoside、cyanidin-3-glucosylrutinoside、cyanidin-3-xylosylrutinoside和cyanidin-3-rutinoside。這4種花色苷的含量由高到低依次為,cyanidin-3-xylosylrutinoside

8、(83.74％)>>delphinidin-3-xylosylrutinoside(7.30％)>cyanidin-3-glucosylrutinoside(5.03％)>cyanidin-3-rutinoside(3.91％)。pH穩(wěn)定性實驗結(jié)果表明,cyanidin-3-xylosylrutinoside在pH<4下穩(wěn)定,保持其原有的結(jié)構(gòu)及吸收特征。熱穩(wěn)定性研究結(jié)果表明,cyanidin-3-xylosylrutinoside較活潑