新型GLP-1-GIP雙受體激動劑對帕金森病MPTP模型小鼠神經(jīng)保護作用的研究及其與利拉魯肽的比較.pdf

1、目的：①觀察新型的GLP-1/GIP雙受體激動劑對MPTP誘導的帕金森病小鼠模型的運動障礙、神經(jīng)炎癥反應(yīng)及神經(jīng)營養(yǎng)因子釋放的影響；②比較新型的GLP-1/GIP雙受體激動劑DA3-CH與GLP-1單受體激動劑Liraglutide對于帕金森病小鼠模型的保護作用。
　　方法：C57bl/6雄性小鼠隨機分為4組，每組10只：(1)對照組(Control組)：給予生理鹽水腹腔注射(0.2ml/日)；(2)MPTP模型組(MPTP組)：腹

2、腔注射MPTP(25mg/kg/日)；(3)DA3-CH組：在腹腔注射MPTP(25 mg/kg/日)的基礎(chǔ)上，30分鐘后腹腔注射DA3-CH(25nmol/kg/日)；(4) liraglutide組(利拉魯肽組)，腹腔注射MPTP(20 mg/kg/日)基礎(chǔ)上，30分鐘后給予Liraglutide(25nmol/kg/日)再次腹腔注射。按照上述給藥方案，連續(xù)處理7日，在此期間對小鼠進行體重監(jiān)測、血糖監(jiān)測、轉(zhuǎn)棒實驗、懸掛試驗行為學檢測

3、。第8日將小鼠處死并提取腦組織，采用免疫組織化學方法對小鼠黑質(zhì)區(qū)酪氨酸羥化酶（Tyrosine hydroxylase，TH）標記的多巴胺能神經(jīng)元、離子鈣接頭受體分子-1（Ionized calcium bindingadaptor molecule-1，IBA-1）標記的小膠質(zhì)細胞、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein，GFAP）標記的星型膠質(zhì)細胞、膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（Glial De

4、rived Neurotrophic Factor，GDNF)標記的陽性細胞進行計數(shù)，并對紋狀體區(qū)TH標記的多巴胺神經(jīng)纖維陽性區(qū)域進行光密度值分析。使用Western Blot方法檢測各組小鼠腦內(nèi)TH、IBA-1、GFAP、GDNF的蛋白表達。
　　結(jié)果：⑴一般情況觀察： MPTP模型組較正常組小鼠自主活動減少、有豎尾立毛現(xiàn)象、有較明顯的肢體震顫、行走不穩(wěn)；DA3-CH組及Liraglutide組較 MPTP模型組小鼠自主活動多、

5、無豎毛現(xiàn)象出現(xiàn)、偶可見豎尾行為、無明顯肢體震顫、行走不穩(wěn)現(xiàn)象。⑵體重及血糖監(jiān)測：當監(jiān)測實驗期間的血漿葡萄糖水平和體重時，發(fā)現(xiàn)各組之間葡萄糖水平及體重沒有明顯差異（p>0.05）。⑶在轉(zhuǎn)棒實驗及懸掛實驗中，DA3-CH及Liraglutide均可改善MPTP導致的小鼠運動功能障礙(p<0.001)，且DA3-CH效果更加顯著(p<0.001)。⑷TH陽性神經(jīng)元及神經(jīng)纖維數(shù)量：給以MPTP腹腔注射后，與對照組對比，黑質(zhì)區(qū)TH陽性多巴胺能神經(jīng)

6、元及紋狀體區(qū)TH陽性多巴胺神經(jīng)纖維數(shù)目明顯減少，差異顯著(p<0.001)；DA3-CH組及Liraglutide組黑質(zhì)區(qū)TH陽性多巴胺能神經(jīng)元細胞數(shù)及紋狀體區(qū)TH陽性多巴胺神經(jīng)纖維均高于MPTP組(p<0.001)；DA3-CH組黑質(zhì)區(qū)TH陽性多巴胺能神經(jīng)元細胞數(shù)及紋狀體區(qū) TH陽性多巴胺神經(jīng)纖維明顯高于Liraglutide組(p<0.001)。⑸IBA-1陽性細胞數(shù)：MPTP模型組與對照組相較，黑質(zhì)區(qū)IBA-1陽性細胞數(shù)目明顯增多

7、(p<0.001)；經(jīng)DA3-CH及Liraglutide治療后，黑質(zhì)區(qū)IBA-1陽性細胞數(shù)減少(p<0.001)；而DA3-CH組黑質(zhì)區(qū)IBA-1陽性細胞數(shù)明顯少于Liraglutide組(p<0.001)。⑹GFAP陽性細胞數(shù)：與對照組相較，MPTP模型組黑質(zhì)區(qū)GFAP陽性細胞數(shù)目均明顯增多(p<0.001)；DA3-CH組及Liraglutide組比MPTP模型組黑質(zhì)區(qū)GFAP陽性細胞數(shù)減少(p<0.001)；DA3-CH組黑質(zhì)區(qū)

8、GFAP陽性細胞數(shù)明顯少于Liraglutide組(p<0.001)。⑺GDNF陽性細胞數(shù)：MPTP模型組與對照組比較，黑質(zhì)區(qū)GDNF陽性細胞數(shù)目均明顯減少(p<0.001)；DA3-CH組及Liraglutide組GDNF陽性細胞數(shù)明顯高于MPTP組(p<0.001)；而DA3-CH組GDNF陽性細胞數(shù)明顯高于Liraglutide組GDNF陽性細胞數(shù)(p<0.001)。⑻酪氨酸羥化酶TH含量：MPTP模型組、Liraglutide組

9、、DA3-CH組較對照組的TH蛋白含量均減少(p<0.001)，MPTP模型組最少，Liraglutide組次之，DA3-CH組含量明顯高于MPTP模型組及Liraglutide組(p<0.001)。⑼IBA-1表達水平：各處理組較對照組IBA-1表達量均明顯增長(p<0.001)， MPTP模型組最多， Liraglutide組次之， DA3-CH組含量明顯少于MPTP模型組及Liraglutide組(p<0.001)。⑽GFAP表達

10、水平：生理鹽水對照組GFAP表達量最低(p<0.001)，MPTP模型組GFAP表達量最多，Liraglutide組次之，DA3-CH組含量明顯少于MPTP模型組及Liraglutide組(p<0.001)。⑾GDNF表達水平：與對照組比較，藥物處理組的 GDNF表達量均降低(p<0.001)，MPTP模型組GDNF表達量最少，Liraglutide組次之，DA3-CH組GDNF含量明顯高于MPTP模型組及Liraglutide組(p<