基于犬尿氨酸代謝通路探索抑郁癥治療的生物標(biāo)記物.pdf

1、重性抑郁障礙（Major Depressive Disorder，MDD）通常又稱為抑郁癥，臨床上以情緒低落、快感喪失為主要特征，并常常伴有失眠、食欲降低、體重減輕及性欲減退等軀體癥狀。目前，抑郁癥已成為世界第四大疾病，尋找與抑郁癥的發(fā)病與轉(zhuǎn)歸關(guān)系密切的體內(nèi)生物標(biāo)記物，以作為更客觀反映病情進(jìn)展與藥物療效的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)一直是抑郁癥臨床治療亟待解決的問(wèn)題。本研究分為四個(gè)部分：
　　第一部分：LC-MS/MS測(cè)定人血清中犬尿氨酸能活性物質(zhì)方

2、法的建立及驗(yàn)證。
　　目的：
　　建立測(cè)定人血清中的色氨酸（TRP），犬尿氨酸（KYN）和犬尿喹啉酸（KYNA）的高效液相串聯(lián)質(zhì)譜方法。
　　方法：
　　采用Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm）為固定相，TRP-KYN流動(dòng)相為甲醇：水（45:55，v/v，各含5 mmoL·L-1甲酸銨）；KYNA流動(dòng)相為甲醇:水（35:65，v/v，各含5 mmoL·L-1甲

3、酸銨），流速為0.5 mL·min-1，柱溫35℃。質(zhì)譜條件采用電噴霧電離源（ESI），檢測(cè)方式為正離子模式，多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）進(jìn)行測(cè)定。分析物的離子質(zhì)荷比分別為m/z205.1→188.1（TRP），m/z209.1→146.1（KYN），m/z190.1→144.1（KYNA），m/z214.1→149.1（KYN-13C415N），m/z195.1→149.1（KYNA-d5）。
　　結(jié)果：
　　TRP，KYN和K

4、YNA的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍分別為1000～50000、100～5000及1～60 ng·mL-1，且線性良好。TRP，KYN和KYNA的四個(gè)質(zhì)控（QC）濃度的準(zhǔn)確度在88.20％～108.31%，日內(nèi)精密度 RSD在0.55%～2.67%，日間精密度RSD在2.80%～10.73%。色氨酸，犬尿氨酸和犬尿喹啉酸血樣在-20℃冷凍90天的穩(wěn)定性良好。
　　第二部分：LC-MS/MS測(cè)定人血清中犬尿氨酸能活性物質(zhì)的臨床應(yīng)用。
　　目的

5、：
　　考察在健康受試者與抑郁癥患者血清中犬尿氨酸能活性物質(zhì)含量的差異；考察抑郁癥患者重復(fù)經(jīng)顱磁刺激（rTMS）治療前后犬尿氨酸活性物質(zhì)含量的變化趨勢(shì)。
　　方法：
　　收集健康受試者（26例）及重復(fù)經(jīng)顱磁刺激治療抑郁癥患者（54例）的血清，采用LC-MS/MS檢測(cè)方法測(cè)定血清中TRP，KYN和KYNA的含量。
　　結(jié)果：
　　抑郁癥患者血清中TRP，KYN和KYNA的濃度顯著低于健康受試者，前兩者的差異具

6、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但KYNA濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。抑郁癥患者經(jīng) rTMS治療前后三種物質(zhì)濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　第三部分：基于抑郁大鼠模型探究其血漿中的犬尿氨酸能活性物質(zhì)。
　　目的：
　　考察抑郁組與對(duì)照組大鼠血漿中犬尿氨酸能活性物質(zhì)及其代謝酶的含量變化。
　　方法：
　　基于LC-MS/MS法，建立大鼠血漿中TRP，KYN和KYNA的含量測(cè)定方法。通過(guò)28

7、天慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激刺激（CUMS）建立抑郁大鼠模型，并進(jìn)行行為學(xué)測(cè)定。通過(guò)ELISA試劑盒檢測(cè)代謝酶吲哚胺2，3-雙加氧酶（IDO）和犬尿氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（KAT）的含量。
　　結(jié)果：
　　經(jīng)過(guò)28天CUMS應(yīng)激，大鼠體重、24 h攝食量、糖水偏愛(ài)度均小于對(duì)照組；曠場(chǎng)（Open-Field）實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)總路程及站立次數(shù)也小于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。造模前大鼠血漿中TRP、KYN和KYNA的含量分別為138

8、15.42±1755.61 ng·mL-1，315.92±84.36 ng·mL-1，8.70±3.00 ng·mL-1；在造模28d后，抑郁模型組大鼠血漿中TRP， KYN和KYNA的含量均低于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。抑郁模型大鼠血漿中的IDO和KATⅡ酶含量均相對(duì)高于對(duì)照組大鼠，且從造模14 d開(kāi)始兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　第四部分：抑郁模型大鼠血漿中文拉法辛及其代謝物的藥代動(dòng)力學(xué)研究。

9、
　　目的：
　　比較抑郁模型大鼠血漿中文拉法辛（VLF）及其代謝物O-去甲基文拉法辛（ODV）與對(duì)照組大鼠的藥代動(dòng)力學(xué)差異?？疾旖o予文拉法辛治療前后，抑郁模型大鼠血漿中TRP、KYN和KYNA的含量變化。
　　方法：
　　基于LC-MS/MS法建立同時(shí)檢測(cè)大鼠血漿中VLF及ODV的方法學(xué)并驗(yàn)證。通過(guò)CUMS建立大鼠抑郁模型，分別選擇8只健康和抑郁大鼠，給予鹽酸文拉法辛原料藥（20.25 mg·kg-1），分別于

10、給藥前和給藥后10，20，30，40，60，90，120，180，240，300，360，480 min取血，計(jì)算其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果：
　　抑郁癥組VLF的AUC0-8和 AUC∞從314.18±170.97μg·h·L-1和329.25±184.53μg·h·L-1顯著升高至703.25±334.22μg·h·L-1和754.52±367.96μg·h·L-1，增加約2.24倍和2.29倍（P<0.05）；對(duì)照組

11、和抑郁組CL/F分別為86.66 L·h-1·kg-1和41.25 L·h-1·kg-1，抑郁組下降約52%，顯示抑郁組中的大鼠表現(xiàn)為更快的吸收和緩慢的消除。抑郁模型組ODV的Cmax，AUC0-8和AUC∞與對(duì)照組比較有差異，分別為對(duì)照組的3.07倍，1.82倍和2.22倍，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。經(jīng)過(guò)4周刺激，抑郁模型組大鼠血漿中TRP、KYN和KYNA的含量總體呈下降趨勢(shì)，當(dāng)給予抗抑郁藥文拉法辛后，其呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。