細胞表面新型微囊泡的分離及其特性研究.pdf

1、細胞表面微囊泡是貼壁細胞鋪展后存在于細胞表面的與細胞質膜綁定的半球狀突起，直徑約為1um。目前，僅依據(jù)尺寸的相似性，有少量報道把這種細胞表面微囊泡當作釋放型細胞外微顆粒的前體來看待，既缺乏直接的證據(jù)表明兩者的相關性，也因缺乏有效的分離純化方法無法對細胞表面微囊泡的結構和功能進行深入研究。因此，非常有必要提供直接證據(jù)鑒定細胞表面微囊泡是屬于細胞外微顆粒的前體還是一種具有獨立結構和生理功能的新型微囊泡；也非常有必要建立一種分離、純化細胞表面

2、微囊泡的有效方法，為后續(xù)的結構和功能研究打下堅實基礎。
　　本課題以臍靜脈內皮細胞系HUVEC和人肝癌細胞系HepG-2兩種貼壁細胞為細胞模型來研究細胞表面微囊泡。通過共聚焦顯微鏡和掃描電鏡觀察首先確定了這種微囊泡是存在于細胞表面，通過特異標志物的免疫熒光染色也排除了這種微囊泡是細胞質中線粒體和多泡小體等細胞器頂起所致的可能性；隨后，通過已被廣泛認可的特異性標志物（CD31、CD146、CD63和PS等）的免疫熒光染色，證明這種微

3、囊泡不屬于細胞外微顆粒、外泌小泡和凋亡小體；實驗還發(fā)現(xiàn)，這種微囊泡能夠被70％以上濃度的乙醇和氯仿甲醇溶解，但能被脂質固定試劑鋨酸所保護，說明這種微囊泡是具有脂質成分的結構；免疫熒光實驗還發(fā)現(xiàn)，這種微囊泡表面可能含有FAK、GM1、GM3或小窩蛋白-1等分子，但不是其所特有；進一步強烈證據(jù)表面，細胞表面微囊泡對Triton X-100、SDS和saponin等去垢劑具有極強的抗性，是這種微囊泡具有的獨特物化性質之一；最后，通過大量的探索

4、研究，利用其獨特的物化性質本課題實現(xiàn)了細胞表面微囊泡的有效分離，為該膜結構的分子特性研究和組分分析提供了可能。
　　本課題提供了堅實、可靠的證據(jù)，證明細胞表面微囊泡既不是細胞內細胞器（如線粒體和多泡小體等）頂起所致、也不是細胞外囊泡（如細胞外微顆粒、外泌小泡和凋亡小體等）的前體，而是一種位于細胞表面、具有脂質成分和獨特物化性質的新型微囊泡；更為重要的是，本課題首次建立了一種分離細胞表面微囊泡的簡單、有效的分離方法，為其組分、結構和