馬鹿精子膜蛋白提取方法篩選及電泳體系優(yōu)化的研究.pdf

1、成熟精子的膜表面含有多種膜蛋白，有些是精子本身固有的，有些是在精子成熟過程中粘附到精子表面的。精子膜蛋白是精子發(fā)生、成熟過程中的重要標(biāo)志。隨著生命科學(xué)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)精子膜蛋白在維持精子形態(tài)結(jié)構(gòu)完整、完成精子的新陳代謝和生殖功能中發(fā)揮著重要的作用，特別是與精卵識(shí)別、精卵結(jié)合以及質(zhì)膜融合等受精活動(dòng)密切相關(guān)。其中部分可作為抗原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，進(jìn)而影響精子的受精能力，導(dǎo)致免疫性不育。
　　本文以我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物——馬鹿的精子作

2、為實(shí)驗(yàn)材料，篩選出了馬鹿精子膜蛋白提取的適宜方法、建立了其裂解液的理想體系、確定了其SDS-PAGE電泳的最佳條件，同時(shí)對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行了初步分析?，F(xiàn)將研究結(jié)果簡(jiǎn)述如下：
　　1、馬鹿精子膜蛋白提取方法的確定
　　采用三種方法對(duì)馬鹿精子膜蛋白進(jìn)行提取，根據(jù)SDS-PAGE電泳和BCA蛋白含量檢測(cè)結(jié)果確定了NP-40裂解法為馬鹿精子膜蛋白提取的適宜方法。
　　2、馬鹿精子膜蛋白裂解液體系的建立
　　對(duì)馬鹿精子膜蛋白

3、裂解液中去垢劑NP-40和蛋白酶抑制劑PMSF各設(shè)立四個(gè)濃度梯度，對(duì)裂解液添加體積設(shè)立三個(gè)梯度，根據(jù)SDS-PAGE電泳和BCA蛋白含量檢測(cè)結(jié)果確定了NP-40濃度為0.5％、PMSF濃度為0.5mM、提取時(shí)添加裂解液體積為5倍是膜蛋白裂解液的理想體系。
　　3、馬鹿精子膜蛋白SDS-PAGE電泳的最佳條件的(確)定
　　對(duì)馬鹿精子膜蛋白SDS-PAGE電泳分離膠設(shè)立四個(gè)濃度梯度，根據(jù)電泳結(jié)果確定12％為馬鹿精子膜蛋白SDS

4、-PAGE電泳的最佳凝膠條件。
　　4、馬鹿精子膜蛋白的理化性質(zhì)研究發(fā)現(xiàn):
　　(1)共有8種不同分子量的馬鹿精子膜蛋白被提取出來;
　　(2)馬鹿精子膜蛋白的總含量為468.12μg/ml;
　　(3)馬鹿精子膜蛋白有3條較清晰的糖蛋白帶，分別與SDS-PAGE電泳圖譜上分子量為98.4 kDa、67.6 kDa和47.3 kDa的膜蛋白帶相一致。
　　5、馬鹿精子膜蛋白的雙向電泳實(shí)驗(yàn)
　　對(duì)不同細(xì)