[雙語翻譯]醫(yī)學(xué)外文翻譯--上皮細(xì)胞-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)換（譯文）

1、中文 中文 6000 字出處： 出處：Li J Y, Yong T Y, Michael M Z, et al. Review: The role of microRNAs in kidney disease.[J]. Nephrology, 2010, 15(6):599–608.泛素樣蛋白 泛素樣蛋白 FAT10 介導(dǎo) 介導(dǎo) NF-κB 激活 激活JY Li ， TY Yong ， MZ Michael ， JM Gleadle摘要

2、：NF-κB 是一種先天免疫的中心介質(zhì)，與幾種腎病的發(fā)病機(jī)制都有關(guān)。FAT10 是一種 TNF-α-誘導(dǎo)的泛素樣蛋白質(zhì)，被公認(rèn)為在免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用，但是 FAT10 是否參與TNF-α誘導(dǎo)的 NF-κB 活化過程仍然是未知的。在這里，使用 FAT10-/-和 FAT10+/+的小鼠體內(nèi)的腎小管上皮細(xì)胞（RTEC） ，我們觀察到 FAT10 的缺乏阻止了 TNF-α-誘導(dǎo)的 NF-κB 的活化，也降低了 NF-κB 調(diào)節(jié)基因的誘導(dǎo)。除去

3、正常的 IkBα的退化和多次泛素化，F(xiàn)AT10 的缺乏會(huì)降低 TNF-α-誘導(dǎo)的 IkBα的退化和 P65 在 RTECs（腎小管上皮細(xì)胞）中的核易位，表明 IkBα多重泛素化的有缺陷的蛋白酶體的降解。此外，F(xiàn)AT10 的缺乏降低了蛋白酶亞基低分子多肽 2（LMP2）的表達(dá)。用 FAT10 使 FAT10-/- 的腎小管上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)恢復(fù)了 LMP2 的表達(dá)，TNF-α-誘導(dǎo)的 IkBα的降解，P65 的核易位和 NF-κB 的活化。

4、而且 LMP2 的轉(zhuǎn)染恢復(fù)了在 FAT10-/- 的腎小管上皮細(xì)胞中 IkBα的退化。人類的慢性腎臟疾病常見類型與 FAT10 在腎小管間質(zhì)的上調(diào)有關(guān)。這些數(shù)據(jù)說明了 FAT10 介導(dǎo) NF-κB 活化，而且可能在慢性腎臟疾病中促進(jìn)腎小管間質(zhì)炎癥。關(guān)鍵詞：生物標(biāo)志物,糖尿病腎病, 上皮細(xì)胞-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)換,腎疾病,microRNANF-kB 是一種泛素樣的轉(zhuǎn)錄因子，它在免疫反應(yīng)，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期調(diào)控中控制基因的表達(dá)。NF-kB 異

5、常的調(diào)節(jié)可能導(dǎo)致炎癥和自身免疫疾病，損害抗病毒免疫反應(yīng)，并促進(jìn)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化(1-3)。激活的 NF-kB，后續(xù)反應(yīng)產(chǎn)生的細(xì)胞因子、趨化因子和粘附因子在一些腎臟疾病中是重要因素，這些疾病包括：糖尿病腎病(4,5)，高血壓性腎硬化(6,7)，IgA 腎病(8)，膜性腎病(9)和艾滋病病毒相關(guān)腎病(10-12)。經(jīng)典的 NF-kB 活化通路可能被各種刺激誘發(fā)，如：TNF-α。TNF-α-誘導(dǎo)的 NF-κB的活化是通過在質(zhì)膜上的腫瘤壞死因子受

6、體 I 來銜接參與的，隨后的信號(hào)傳導(dǎo)最后激活了IkB 激酶復(fù)合體，同時(shí)又反過來使 IkBα磷酸化。磷酸化的 IkBα迅速地多次泛素化，導(dǎo)致了 IkBα通過 26S 蛋白酶復(fù)合體的降解，NF-kB 的釋放，NF-kB 隨后又轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核并激活靶位基因的轉(zhuǎn)錄(13-16)。26S 蛋白酶體，一種真核細(xì)胞中主要的蛋白酶，識(shí)別并降解多重泛素化蛋白（17,18） 。26S 蛋白酶體的蛋白水解核心復(fù)合體是 20S 核心顆粒，這種顆粒有幾個(gè)亞基構(gòu)成。

7、低分子多肽 2（LMP2）是一種 IFN-γ誘導(dǎo)的亞基，它可以取代亞基 Y（又稱 delta 或者β1）在 20S 核心顆粒中（19） 。LMP2 在 20S 核心顆粒中的存在導(dǎo)致了糜蛋白酶和胰蛋白酶在體外的活化，調(diào)整蛋白酶的切割位點(diǎn)（20,21） 。一些研究已經(jīng)證明了 LMP2 在 IkBα的降解和 NF-kB 隨后的活化過程中扮演著重要的角色。我們先前報(bào)道了 FAT10 在體外艾滋病病毒感染的腎小管上皮細(xì)胞和來自艾滋病病毒攜帶者的腎

8、病患者和常染色體顯性遺傳的多囊腎的腎臟樣本中上調(diào)，而且增加的 FAT10 誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞的凋亡（25）在非應(yīng)激狀態(tài)下的小鼠，F(xiàn)AT10 的敲除引起最小的表型改變，可是這些小鼠在注射了 LPS 之后表現(xiàn)出死亡敏感性的增加（26） 。FAT10 在成熟的樹突狀細(xì)胞和 B 細(xì)胞中表達(dá)（27,28） ，并且可以在各種組織中被前炎癥細(xì)胞因子 IFN-γ和TNF-α誘導(dǎo)（29，30） 。不過 FAT10 在免疫反應(yīng)中的作用還沒有被研究。我們發(fā)現(xiàn)

9、 FAT10在 HIV-1 感染的腎小管上皮細(xì)胞中上調(diào)，而且這種上調(diào)類似于 NF-kB 調(diào)節(jié)基因活化的方式（31） ，加上我們知道 NF-kB 的活化是在多個(gè)水平上通過泛素蛋白激酶系統(tǒng)被控制的，這可以提示我們假設(shè) FAT10 參與調(diào)控 NF-kB 的活化。IRES-EGFP 的共轉(zhuǎn)染并沒有被誘導(dǎo)。這些結(jié)果表明在 FAT10-/-小鼠 RTECs 中 FAT10 的表達(dá)恢復(fù)了 TNF-α和 LPS 誘導(dǎo)了構(gòu)成 pGL2/NF-kB 的 N

10、F-kB 報(bào)道基因的活化。在 RTECs 中 FAT10 對(duì)于 對(duì)于 TNF-α誘導(dǎo)的核轉(zhuǎn)位是必要的 α誘導(dǎo)的核轉(zhuǎn)位是必要的在用 TNF-α處理之前，p65 主要位于 FAT10+/+和 FAT10-/-的 RTECs 的細(xì)胞質(zhì)中（圖4A） 。用 TNF-α（20ng/ml）處理 15 和 60 分鐘后，大部分 p65 在 FAT10+/+RTECs 的核中被檢測(cè)到,但是在 FAT10-/-RTECs 中卻是在細(xì)胞質(zhì)中檢測(cè)到，這表明 T

11、NF-α-誘導(dǎo) NF-kB 的核易位在 FAT10-/-RTECs 中是有缺陷的。在來自于 FAT10+/+和 FAT10-/-小鼠中使用分離出的新鮮原始非永生的 RTECs 也觀察到相似的結(jié)果（如圖 4B） ，這表明了在 p65 易位中觀察到的缺陷并不是 T 抗原永生化的結(jié)果。我們也研究了是否 TNF-α誘導(dǎo)的 p65 易位在從小鼠腹腔分離出來的巨噬細(xì)胞中被破壞。這些在 FAT10+/+巨噬細(xì)胞 TNF-α誘導(dǎo)的 p65 核易位與在

12、FAT10-/-巨噬細(xì)胞中沒有區(qū)別（參考圖 1） 。FAT10-/-RTECs 用 HR-FAT10-IRES-EGFP 或者 HR-IRES-EGFP 慢病毒感染。3 天后，將細(xì)胞與 TNF-α（20ng/ml）或運(yùn)載體一起培養(yǎng) 15 和 60 分。如圖 5 所示，在與 TNF-α培養(yǎng)前，在用病毒感染的 FAT10-/-RTECs 中定位 p65 蛋白質(zhì)；然而，用 TNF-α處理后（15和 60 分） ，p65 主要在用慢病毒感染的

13、FAT10-/-RTECs 的細(xì)胞質(zhì)中檢測(cè)出，而 p65 主要在用 HR-FAT10-IRES-EGFP 感染的 FAT10+/+RTECs 的細(xì)胞核中檢測(cè)出。這些結(jié)果表明用FAT10 表達(dá)運(yùn)載體的 FAT10-/-RTECs 轉(zhuǎn)導(dǎo)是足以恢復(fù) TNF-α誘導(dǎo) NF-kB 核易位的。在 RTECs 中 FAT10 對(duì)于 對(duì)于 TNF-α誘導(dǎo) α誘導(dǎo) IkBα降解是必要的 α降解是必要的 在 FAT10+/+RTECs 總的 IkBα通過

14、Western blotting 方法分析證明了通過 5 分鐘的TNF-α處理厚蛋白水平是降低的,在 10 分鐘時(shí)達(dá)到了一個(gè)最低點(diǎn)，這個(gè)水平持續(xù)從基線降低了 60 分鐘（圖 6A,B） 。與此相反，在 TNF-α暴露后總的 IkBα蛋白質(zhì)在 FAT10-/-RTECs中并沒有降低，這說明 TNF-α誘導(dǎo) IkBα降解在 FAT10-/-RTECs 中是缺乏的（圖 6A 和B） 。在 TNF-α暴露前后 IkBα的 mRNA 的表達(dá)在

15、FAT10+/+和 FAT10-/-RTECs 中并沒有顯著差異（圖 6C） 。用 FAT10-表達(dá)的慢病毒（HR-FAT10-IRES-EGFP）或空控慢病毒(HR-IRES-EGFP)轉(zhuǎn)導(dǎo) FAT10-/-RTECs。經(jīng)過三天的轉(zhuǎn)導(dǎo)，將細(xì)胞與 TNF-α或運(yùn)載體一起培養(yǎng) 10 分鐘。用TNF-α處理后，在用 HR-FAT10-IRES-EGFP 感染的 FAT10-/-RTECs 中而不是用控制病毒感染的細(xì)胞中 IkBα蛋白質(zhì)水平顯

16、著地降低了（圖 6D） 。因此，F(xiàn)AT10 在 FAT10-/-RTECs中的表達(dá)足以恢復(fù) TNF-α誘導(dǎo)的 IkBα降解。在 FAT10-/-RTECs 中 TNF-α誘導(dǎo) α誘導(dǎo) IkBα磷酸化是不受影響的 α磷酸化是不受影響的 在 FAT10+/+和 FAT10-/-RTECs 中，p-IkBα的水平在用 TNF-α處理后快速地增加了，在 5 分鐘達(dá)到了最高水平。在 FAT10-/-RTECs 中 TNF-α誘導(dǎo) IkBα磷酸化是

17、不會(huì)受損的，與 FAT10+/+RTECs 相比似乎還有些增加（圖 7） 。有趣的是，在 FAT10+/+RTECs 中用 TNF-α處理后 20 分鐘，pIkBα的水平返回到了處理前的水平，但是用 TNF-α處理 20 分鐘后在FAT10-/-RTECs 中 p-IkBα的水平比處理前仍有 6.2 倍的增加。這些結(jié)果表明 p-IkBα的降解在 FAT10-/-RTECs 中是受損的。FAT10 并不影響泛素化和磷酸化 并不影響泛素化和

18、磷酸化 IkBα也與 α也與 p-IkBα相互沒有影響 α相互沒有影響在用 TNF-α和 MG132（為了阻斷多重泛素化的蛋白質(zhì)的蛋白酶體降解）處理后，p-IkBα被免疫沉淀，用 Western blotting 方法將泛素化 p-IkBα用抗泛素化被檢測(cè)出。泛素化p-IkBα的水平在 FAT10+/+和 FAT10-/-TRECs 中是相似的（圖 8A） ，這表明在 FAT10-/-RTECs 中 NF-kB 的不能激活并不是 p-I