最小抑菌濃度測定

1、幾種測定抗菌藥物最低抑菌濃度（MIC）方法1.1.常量肉湯稀釋法1.1.1.抗菌藥物貯存液制備抗菌藥物貯存液濃度不應低于1000μgml(如1280μgml)或10倍于最高測定濃度。溶解度低的抗菌藥物可稍低于上述濃度?？咕幬镏苯淤徸詮S商或相關機構。所需抗菌藥物溶液量或粉劑量可公式進行計算。例如：需配制100ml濃度為1280μgml的抗生素貯存液，所用抗生素為粉劑，其藥物的有效力為750μgmg。用分析天平精確稱取抗生素粉劑的量為18

2、2.6mg。根據(jù)公式計算所需稀釋劑用量為：（182.6mg750μgml）1280μgml=107.0ml，然后將182.6mg抗生素粉劑溶解于107.0ml稀釋劑中。制備抗菌藥物貯存液所用的溶劑和稀釋劑見表5。配制好的抗菌藥物貯存液應貯存于60℃以下環(huán)境，保存期不超過6個月。1.1.2.藥敏試驗用抗菌藥物濃度范圍根據(jù)NCCLS抗菌藥物敏感性試驗操作標準，藥物濃度范圍應包含耐藥、中介和敏感分界點值，特殊情況例外。1.1.3.培養(yǎng)基NCC

3、LS推薦使用MuellerHinton（MH）肉湯，pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厭氧菌在此培養(yǎng)基中生長良好。在測試葡萄球菌對苯唑西林的敏感性時，應在肉湯中加入2%（WV）氯化鈉，按制造廠家的要求配制需要量的MH肉湯。嗜血桿菌屬菌使用HTM肉湯，肺炎鏈球菌和其它鏈球菌使用含2%~5%溶解馬血的MH肉湯。1.1.4.接種物的制備有2種方法配制接種物，一是細菌生長方法，用接種環(huán)挑取形態(tài)相似待檢菌落35個，接種于45ml的水解酪蛋白（MH）

4、肉湯中，35℃孵育26h。增菌后的對數(shù)生長期菌液用生理鹽水或MH肉湯校正濃度至0.5麥氏比濁標準，約含1~2108CFUml。二是直接菌落懸液配制法，對某些苛養(yǎng)菌，如流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和鏈球菌及甲氧西林耐藥的葡萄球菌等菌株，推薦直接取培養(yǎng)18~24h的菌落調(diào)配成0.5麥氏比濁標準的菌懸液。用MH肉湯將上述菌懸液進行1∶100稀釋后備用。注意應在15分鐘內(nèi)接種完配制好的接種物，并取一份接種物在非選擇性瓊脂平板上傳代培養(yǎng)，以檢查接種物

5、純度。1.1.5.稀釋抗菌藥物的制備及菌液接種取無菌試管（13100mm）13支，排成一排，除第1管加入1.6mlMH肉湯外，其余每管加入MH肉湯1ml，在第1管加入抗菌藥物原液（如1280μgml）0.4ml混勻，然后吸取1ml至第2管，混勻后再吸取1ml至第3管，如此連續(xù)倍比稀釋至第11管，并從第11管中吸取1ml棄去，第12管為不含藥物的生長對照。此時各管藥物濃度依次為256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.

6、25μgml。然后在每管內(nèi)加入上述制備好的接種物各1ml，使每管最終菌液濃度約為5105CFUml。第1管至第11管藥物濃度分別為128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μgml。1.1.6.孵育將接種好的稀釋管塞好塞子，置35℃普通空氣孵箱中孵育16~20h；嗜血桿菌和鏈球菌在普通空氣孵箱中孵育20~24h；對可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐萬古霉素腸球菌應持續(xù)孵育滿24h。1.1.7.結果判斷與解釋在讀取和報

7、告所測試菌株的MIC前，應檢查生長對照管的細菌生長情況是否良好，同時還應檢查接種物的傳代培養(yǎng)情況以確定其是否污染，質(zhì)控菌株的MIC值是否處于質(zhì)控范圍。以肉眼觀察，藥物最低濃度管無細菌生長者，即為受試菌的MIC。甲氧芐胺嘧啶或磺胺藥物的肉湯稀釋法終點判斷，與陽性生長對照管比較抑制80%細菌生長管藥物濃度為受試菌MIC。根據(jù)NCCLS推薦的分界點值標準，判斷耐藥（resistantR）、敏感(susceptibleS)或中介（interme

8、diateI）。S表示被測菌株所引起的感染可以用該抗菌藥物的常用劑量治療有3.E試驗（Etest）E試驗是指濃度梯度瓊脂擴散試驗，其原理基本同擴散法，即濃度呈連續(xù)梯度的抗菌藥物從塑料試條中向瓊脂中擴散，在試條周圍抑菌濃度范圍內(nèi)受試菌的生長被抑制，從而形成透明的抑菌圈。E試驗綜合了稀釋法和擴散法的原理和特點，同時還彌補了二者的一些不足，可以像稀釋法一樣直接定量測出抗菌藥物對受試菌的MIC。3.1.培養(yǎng)基、菌液制備和接種同紙片擴散法。3.2