釀酒葡萄再生體系的建立及遺傳轉(zhuǎn)化的初步研究.pdf

1、葡萄遺傳背景復(fù)雜，育種周期長(zhǎng)，常規(guī)育種方法較難實(shí)現(xiàn)品種改良，隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的出現(xiàn)和發(fā)展，把目的基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可在不改變多種優(yōu)良性狀的前提下定向改良某些性狀，提高育種效率，為葡萄的育種改良提供了一條新途徑。
　　 葡萄再生頻率低是造成葡萄遺傳轉(zhuǎn)化困難的關(guān)鍵因素之一。本研究以優(yōu)良釀酒葡萄品種歌海娜(Grenache)、霞多麗（Chardonnay）、西臘(Syrah)及砧木3309試管苗為試材，對(duì)影響離體莖段不定芽誘導(dǎo)的因素，如

2、基因型、接種外植體類(lèi)型、基本培養(yǎng)基類(lèi)型、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類(lèi)及濃度配比、接種方式以及培養(yǎng)條件等進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究，建立了歌海娜、西臘及霞多麗離體莖段再生體系;以釀酒葡萄品種霞多麗胚性細(xì)胞系為試驗(yàn)材料，采用GUS檢測(cè)法，對(duì)影響農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化的因素如超聲波處理時(shí)間、AS濃度、DTT濃度進(jìn)行了研究，優(yōu)化了遺傳轉(zhuǎn)化的條件;并以歌海娜、西臘離體莖段為試驗(yàn)材料，進(jìn)行了抗寒目的基因CBF1轉(zhuǎn)化葡萄的研究。
　　 主要研究結(jié)果如下:
　　

3、 1.基因型是影響葡萄離體莖段再生的重要因素，研究結(jié)果表明:歌海娜品種的不定芽誘導(dǎo)效率顯著高于西臘和霞多麗品種。
　　 2.通過(guò)對(duì)不同培養(yǎng)基的篩選，確定了MS培養(yǎng)基為霞多麗離體莖段誘導(dǎo)不定芽的最適基本培養(yǎng)基。
　　 3.歌海娜、霞多麗和西臘三種基因型中，僅從莖段外植體誘導(dǎo)出不定芽，而葉片和葉柄外植體均未能誘導(dǎo)出不定芽。莖段不同接種方式對(duì)不定芽的誘導(dǎo)效果有顯著影響。
　　 4.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)離體莖段不定芽的誘導(dǎo)

4、有較大影響。細(xì)胞分裂素BA能使歌海娜、霞多麗、西臘及砧木3309等四種基因型的離體莖段誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽，而TDZ只能誘導(dǎo)西臘及砧木3309的莖段產(chǎn)生不定芽，而且BA對(duì)不定芽的誘導(dǎo)效率要高于TDZ，由TDZ誘導(dǎo)的不定芽畸形較多，不易成苗。歌海娜離體莖段最適再生培養(yǎng)基為:MS+BA1.0mg/L+IBA0.01mg/L，不定芽誘導(dǎo)率為25％;西臘離體莖段再生培養(yǎng)基為:MS+BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L，不定芽誘導(dǎo)率為5.9％;砧

5、木3309離體莖段再生培養(yǎng)基為:MS+BA1.0mg/L+IBA0.01mg/L，不定芽誘導(dǎo)率為9.5％;不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:1/2MS+IAA0.05mg/L。霞多麗莖段誘導(dǎo)叢生不定芽的最適培養(yǎng)基為:MS+BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L。
　　 5.暗培養(yǎng)處理可顯著提高莖段的不定芽誘導(dǎo)率，適宜暗培養(yǎng)時(shí)間為14d左右。
　　 6.通過(guò)對(duì)影響農(nóng)桿菌介導(dǎo)葡萄胚性細(xì)胞系遺傳轉(zhuǎn)化效率因素的研究表明，AS濃度、DTT濃度