酪酪肽完全抗原的制備及酪酪肽被動(dòng)免疫對(duì)大鼠營養(yǎng)生理效應(yīng)的影響.pdf

1、本文以酪酪肽(PYY)和載體蛋白(牛血清蛋白，BSA)的偶聯(lián)復(fù)合物作為抗原，主動(dòng)免疫家兔，目的在于制備出含有PYY抗體的血清，用PYY抗血清被動(dòng)免疫大鼠，研究通過免疫中和技術(shù)消耗內(nèi)源性PYY，初步探討PYY對(duì)大鼠生產(chǎn)性能、血清激素水平和組織消化酶的影響。
　　 試驗(yàn)一通過碳二亞胺(EDC)法將PYY和BSA偶聯(lián)制備PYY完全抗原，用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)是否偶聯(lián)成功。
　　 選用健康的雄性家兔三只，其中兩只為試驗(yàn)

2、兔，用合成的PYY-BSA免疫家兔。初次免疫時(shí)用弗式完全佐劑與完全抗原混合，免疫劑量為200μl/只，加強(qiáng)免疫時(shí)用弗氏不完全佐劑與完全抗原混合，免疫劑量為200μl/只。在試驗(yàn)第一天初免后，隔7天加強(qiáng)免疫一次，第二次免疫后每隔10天加強(qiáng)免疫一次，共進(jìn)行6次加強(qiáng)免疫。每次加強(qiáng)免疫后采血，用ELISA法檢測(cè)是否有抗體產(chǎn)生。
　　 試驗(yàn)二選用體重為87.77±1.61g的SD大鼠60只，隨機(jī)分為4個(gè)處理，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3只

3、大鼠。處理一為對(duì)照組，不注射任何抗體；處理二、處理三和處理四為試驗(yàn)組，分別注射PYY抗體血清50μl/只、100μl/只和200μ1/只。每隔7天注射一次，共注射3次，試驗(yàn)期為21天。整個(gè)試驗(yàn)期間，試驗(yàn)大鼠自由采食和飲水。試驗(yàn)結(jié)束后，從頸部取血，并取出大鼠的胰臟、十二指腸和胃。測(cè)定血清中的PYY、胰島素、瘦素、胃泌素和神經(jīng)肽Y的含量，測(cè)定大鼠胰臟、十二指腸中淀粉酶、脂肪酶和胃蛋白酶的活力。
　　 結(jié)果顯示：
　　 ①根據(jù)

4、電泳結(jié)果顯示，PYY與BSA偶聯(lián)成功，PYY-BSA的分子量大于BSA的分子量：
　　 ②根據(jù)ELISA的檢測(cè)顯示，PYY抗體血清在第六次免疫后呈陽性，說明在兔子體內(nèi)產(chǎn)生了PYY抗體。
　　 ③注射不同劑量的PYY抗體對(duì)大鼠平均體重的影響。在0-7天，每個(gè)處理組的大鼠平均體重沒有顯著差異(P＞0.05)；在8-14天，處理二、處理三和處理四組的平均體重顯著高于處理一組(P＜0.05)；在15-21天，處理二、處理三和處理

5、四的平均體重顯著高于處理一(P＜0.05)。
　　 ④注射不同劑量的PYY抗體對(duì)大鼠平均日采食量的影響。在0-7天，處理二、處理三和處理四的平均日采食量顯著高于處理一(P＜0.05);在8-14天，處理二、處理三和處理四的平均日采食量顯著高于處理一（P＜0.05）；在15-21天，處理三和處理四顯著高于處理一和處理二(P＜0.05)。
　　 各處理組在不同階段的料肉比都有所降低。在同一階段，處理四的料肉比比其它幾組的都高

6、，但各組差異不顯著(P＞0.05)。
　　 ⑤注射不同劑量的PYY抗體對(duì)飼料養(yǎng)分利用率的影響。對(duì)于干物質(zhì)的利用率，各組間差異不顯著(P＞0.05)，處理一組對(duì)干物質(zhì)的利用率最高。處理二，處理三和處理四組對(duì)粗蛋白利用率顯著高于處理一(P＜0.05)；處理二、處理三和處理四對(duì)能量的利用率顯著高于處理一(P＜0.05)。
　　 ⑥NPY、瘦素、胃泌素和胰島素隨著PYY抗體注射劑量的增高而增高，但是各組間差異都不顯著（P＞0.0

7、5）。對(duì)于注射高劑量的PYY抗體的處理四組，以上各種激素在血清中的含量都是最高的。
　　 血清PYY水平隨注射劑量的增加而減少，各組間差異不顯著(P＞0.05)。
　　 ⑦胰脂肪酶、胰淀粉酶的比活力隨著PYY抗體注射劑量的增加而升高。胰脂肪酶的活力在各處理組間差異不顯著（P＞0.05），處理四中的胰脂肪酶活力最高；處理四的胰淀粉酶比活力顯著高于其它幾組(P＜0.05)。
　　 ⑧十二指腸脂肪酶和淀粉酶的比活力隨著

8、PYY抗體注射劑量的增加而升高。處理三和處理四的十二指腸脂肪酶的活力顯著高于處理一和處理二（P＜0.05)，處理四的十二指腸脂肪酶活力最高；十二指腸淀粉酶活力在各處理組間差異不顯著(P＞0.05)，處理四中的十二指腸淀粉酶活力最高。
　　 ⑨胃蛋白酶的比活力隨著PYY抗體注射劑量的增加而降低，各處理組間差異不顯著（P＞0.05），處理一的胃蛋白酶活力最高。
　　 結(jié)果表明，通過化學(xué)方法可以將PYY和BSA偶聯(lián)制成完全抗原