酪蛋白糖巨肽的制備及其抑菌特性的研究.pdf

1、酪蛋白巨肽(Casein Glycomacropeptide，CGMP)是一種來源于哺乳動(dòng)物k-酪蛋白，具有64個(gè)氨基酸殘基(106-109)的糖肽。它是在干酪生產(chǎn)過程中，凝乳酶(或胃蛋白酶)水解κ-casein中Phe105-Met106的肽鍵所得到。CGMP具有不同的種類，主要是由于其不同的糖基化和磷酸化結(jié)構(gòu)。CGMP已知具有多種生物活性，例如結(jié)合霍亂毒素和大腸桿菌毒素；抑制細(xì)菌和病毒的粘附作用；抑制胃液分泌；促進(jìn)雙歧桿菌增殖；調(diào)節(jié)

2、免疫系統(tǒng)等。本文研究了胃蛋白酶水解酪蛋白制備CGMP的工藝條件，并發(fā)現(xiàn)了粗品CGMP對口腔致病菌-變形鏈球菌具有抑制作用。
　　 在本文中，CGMP是通過胃蛋白酶酶解牛乳酪蛋白產(chǎn)生的。實(shí)驗(yàn)研究了水解時(shí)間、溫度、pH、酶與底物比這四個(gè)因素對CGMP生成量的影響。通過正交實(shí)驗(yàn)，得到最佳水解條件是：水解時(shí)間為40min，pH1.8，溫度為45℃，酶與底物比([E]/[S])為134.4U/g。
　　 通過間苯二酚-鹽酸法，以C

3、GMP標(biāo)準(zhǔn)品為對照，進(jìn)行水解產(chǎn)物中CGMP的檢測，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：水解產(chǎn)物與CGMP標(biāo)準(zhǔn)品所顯顏色相同。進(jìn)而證明了該水解產(chǎn)物中確有CGMP存在。隨后，實(shí)驗(yàn)通過間苯二酚-鹽酸法，測定水解產(chǎn)物中唾液酸含量，并對照CGMP標(biāo)準(zhǔn)曲線，推算出水解產(chǎn)物中CGMP含量為30.74％。實(shí)驗(yàn)采用Tricine-SDS-PAGE電泳，對水解產(chǎn)物中的CGMP進(jìn)行了鑒定，并考察其分子量的分布。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明水解產(chǎn)物中CGMP分子量約為7.0kDa和15kDa不等。

4、
　　 采用濾紙片擴(kuò)散法，研究粗品CGMP抑制變形鏈球菌生長的特性。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：含有粗品CGMP的濾紙片周圍抑菌圈清晰透明，證明粗品CGMP對變形鏈球菌具有明顯的抑制作用。采用96-孔板法對粗品CGMP對變心鏈球菌的抑制作用進(jìn)行定量研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：粗品CGMP對變形鏈球菌的最小抑菌濃度為24mg/mL，此外當(dāng)粗品CGMP濃度為12mg/mL、6mg/mL、3mg/mL時(shí)，粗品CGMP對變形鏈球菌的抑制率也較高，分別為：88％、