酶解干酪素生產(chǎn)酪蛋白糖巨肽工藝研究.pdf

1、酪蛋白巨肽（Casein Glycomacropeptide，CGMP）是一種由凝乳酶（或胃蛋白酶）水解酪蛋白中κ-casein的Phe105-Met106的肽鍵得到的具有64個(gè)氨基酸殘基的短肽。CGMP具有多種生物活性。目前酪蛋白糖巨肽的生產(chǎn)主要是從乳清中提取，由于乳清中乳糖、乳清蛋白等的存在，使大規(guī)模生產(chǎn)CGMP存在一定的技術(shù)困難。本文以干酪素為原料，從干酪素的溶解、凝乳酶酶解條件、CGMP的初提、精制以及產(chǎn)品的成分測(cè)定等方面，研究

2、了凝乳酶酶解干酪素制備CGMP的工藝。
　　 通過(guò)研究氫氧化鈉濃度，干酪素溶解量與CGMP得率的關(guān)系，得到最佳的溶解條件為:氫氧化鈉濃度0.16mol/L，干酪素的溶解量為6g/100mL。
　　 結(jié)合單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用Minitab軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)影響酶解的主要因素進(jìn)行了篩選，結(jié)果表明酶解的時(shí)間、溫度、pH、酶與底物比是影響酶解的主因素。根據(jù)Minitab的分析結(jié)果，采用Design Expert軟件中響應(yīng)面設(shè)計(jì)

3、及分析對(duì)酶解主因素進(jìn)行了優(yōu)化，得到的最佳酶解條件為:酶解時(shí)間80 min、酶解溫度42.5℃、酶解pH6.28、酶與底物比270 U/g。此時(shí)酪蛋白糖巨肽的得率為17.91mg/g干酪素。
　　 在酪蛋白糖巨肽的分離純化部分，考察了不同絮凝劑在CGMP初提中的效果、絮凝法與等電點(diǎn)沉淀法的優(yōu)劣、超濾的最佳條件、離子交換樹脂的最佳條件等。結(jié)果表明殼聚糖、硫酸鋁鉀、硫酸鋁等三種絮凝劑的絮凝效果較好，但不如等電點(diǎn)沉淀法;超濾的單因素實(shí)驗(yàn)

4、表明，超濾的最佳條件是:壓力0.276Mpa、轉(zhuǎn)速400r/min、樣品pH7.5。篩選的陰離子交換樹脂D280對(duì)CGMP的分離效果較好，適合工業(yè)化生產(chǎn)。通過(guò)離子交換樹脂的吸附及洗脫條件研究，確立其最適的分離條件為:進(jìn)樣體積1/10BV(柱床體積)，樣品pH7.5，采用0.1 mol/L、0.5mol/L、1.0mol/L的NaCl溶液梯度洗脫，洗脫速度1BV/h，各梯度洗脫體積2BV，CGMP被洗脫的NaCl溶液濃度為0.5mol/L