克氏原螯蝦過敏原的性質(zhì)研究.pdf

1、近年來，隨著克氏原螯蝦年產(chǎn)量及消費(fèi)量的快速增長(zhǎng)，因食用克氏原螯蝦而導(dǎo)致過敏的病例時(shí)有發(fā)生，影響著克氏原螯蝦的食用安全性及國(guó)民的身體健康。因此，開展克氏原螯蝦過敏原的研究顯得迫切而有意義。本文以克氏原螯蝦為研究對(duì)象，分析其過敏組分，重點(diǎn)完成過敏原的分離純化及性質(zhì)分析，探討加工處理方法對(duì)過敏原致敏性的影響，為開發(fā)低致敏性或無致敏性的產(chǎn)品提供重要理論依據(jù)。
　　利用27份甲殼類過敏患者血清，通過Western-blotting技術(shù)，檢測(cè)

2、出克氏原螯蝦肌肉中40kDa、22kDa及36kDa的蛋白為其過敏組分。
　　采用硫酸銨鹽析、離子交換柱層析的方法從克氏原螯蝦肌漿中分離純化出40kDa的的過敏組分，并應(yīng)用兔抗擬穴青蟹AK多克隆抗體鑒定其為精氨酸激酶（arginine kinase，AK）。其性質(zhì)研究結(jié)果顯示，AK是糖含量為0.60%的糖蛋白；對(duì)熱不穩(wěn)定，高溫處理可以降低其IgE結(jié)合活性；對(duì)酸不穩(wěn)定，強(qiáng)堿對(duì)其IgE結(jié)合活性有一定的影響；AK對(duì)胰液具有耐受性；AK具

3、有復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)，同時(shí)存在線性抗原表位和構(gòu)象抗原表位。此外，蒸煮處理能有效降低其IgE結(jié)合活性。
　　采用硫酸銨鹽析、柱層析的方法從克氏原螯蝦肌漿中分離純化出22kDa的過敏組分，并通過MALDIMS鑒定其為肌質(zhì)鈣結(jié)合蛋白（sarcoplasmic calcium-binding protein，SCP）；其性質(zhì)研究結(jié)果表明，SCP是一種糖含量為4.90%的糖蛋白；對(duì)熱穩(wěn)定，在強(qiáng)酸堿條件下均不被降解，其熱處理及酸堿處理產(chǎn)物的IgE

4、結(jié)合活性并沒有降低；能被消化酶所降解；SCP具有多態(tài)性，SCP-II的IgE結(jié)合活性較弱，SCP含有a、b、c三種亞基，均有IgE結(jié)合活性；SCP含有較多的轉(zhuǎn)角及卷曲結(jié)構(gòu)，易于形成抗原表位。
　　采用制備丙酮粉、等電點(diǎn)沉淀、硫酸銨鹽析、柱層析等方法從克氏原螯蝦肌原纖維中分離純化出36kDa的過敏組分，并應(yīng)用兔抗擬穴青蟹TM多克隆抗體鑒定其為原肌球蛋白（tropomyosin，TM）。其性質(zhì)研究結(jié)果顯示，TM的糖含量為1.14%，對(duì)

5、熱穩(wěn)定；對(duì)酸堿具有耐受性；能被消化酶所降解；TM是由α-螺旋構(gòu)成的簡(jiǎn)單的超螺旋結(jié)構(gòu)，以線性表位居多。
　　肌球蛋白輕鏈（myosin light chain，MLC）和血藍(lán)蛋白（hemocyanin，HMC）是蝦類的新型過敏原。本文先對(duì)其進(jìn)行分離純化，再利用9份甲殼類過敏患者血清進(jìn)行確認(rèn)。
　　采用制備丙酮粉、等電點(diǎn)沉淀、硫酸分級(jí)鹽析及柱層析方法從克氏原螯蝦肌原纖維中分離純化出18kDa的MLC，并通過MALDIMS進(jìn)行鑒定

6、。利用甲殼類過敏患者血清檢測(cè)，初步判斷MLC為克氏原螯蝦的過敏原。其性質(zhì)研究結(jié)果顯示，MLC的糖含量為4.30%；對(duì)熱穩(wěn)定；在強(qiáng)酸堿性條件下均不被降解；但能被消化酶所降解。MLC主要由α-螺旋和卷曲組成，含有很少的β-折疊和轉(zhuǎn)角，且同時(shí)具有線性抗原表位和構(gòu)象抗原表位。
　　采用離心及凝膠柱層析的方法從克氏原螯蝦血淋巴中分離純化出HMC，并應(yīng)用兔抗凡納濱對(duì)蝦HMC多克隆抗體進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明，HMC是由68、72、76、82、84和

7、88kDa六個(gè)亞基組成的六聚體。利用甲殼類過敏患者血清檢測(cè)，初步判斷HMC為克氏原螯蝦的一種過敏原。其性質(zhì)分析結(jié)果顯示，HMC的糖含量為1.99%；對(duì)熱穩(wěn)定；對(duì)酸不穩(wěn)定；對(duì)胰液耐受性。
　　TM、MLC及SCP具有相似的理化性質(zhì)，都是熱穩(wěn)定性蛋白，對(duì)酸堿穩(wěn)定，都能被消化酶消化；AK和HMC二者的理化性質(zhì)較為相近，均對(duì)酸不穩(wěn)定，能耐胰液消化。AK、SCP、MLC空間結(jié)構(gòu)比TM復(fù)雜。通過血清學(xué)實(shí)驗(yàn)、性質(zhì)分析結(jié)果表明TM是克氏原螯蝦的主