牙鲆彈狀病毒非結(jié)構(gòu)蛋白(NV)的表達(dá)及抗原性初步分析.pdf

1、牙鲆彈狀病毒（Hirame rhabdovirus，HRV）是彈狀病毒科粒外彈狀病毒屬新成員，具有強(qiáng)烈的致病性，給全球海水養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。病毒在入侵宿主細(xì)胞的過(guò)程中，宿主細(xì)胞通過(guò)模式識(shí)別受體(pattern recognition receptors，PRRs）監(jiān)測(cè)病原相關(guān)分子模式(pathogen associated molecular patterns，PAMPs）而感知病毒的入侵，并通過(guò)信號(hào)通路的級(jí)聯(lián)傳遞，協(xié)調(diào)病毒感

2、染早期宿主反應(yīng)，并隨即激活宿主獲得性免疫反應(yīng)。然而，通過(guò)和宿主的相互作用，RNA病毒進(jìn)化出逃逸宿主 RLRs免疫監(jiān)視的不同策略來(lái)干擾宿主 RLRs抗病毒信號(hào)，阻斷 RLRs信號(hào)的傳導(dǎo)，從而導(dǎo)致宿主發(fā)病。多數(shù)情況下，病毒傾向于利用非結(jié)構(gòu)蛋白進(jìn)行此功能。而HRV致病機(jī)制及逃逸宿主免疫監(jiān)視的分子機(jī)制還沒(méi)有得到明確的闡述。
　　本研究根據(jù)GenBank中HRV中國(guó)株全長(zhǎng)基因序列設(shè)計(jì)特異性引物，用RT-PCR方法從病毒懸液中分段擴(kuò)增HRV全

3、長(zhǎng)基因組序列，得到的基因序列拼接后，經(jīng)BLAST比對(duì)發(fā)現(xiàn)與中國(guó)株的同源性達(dá)到99.77％，為后續(xù)獲得感染性克隆奠定基礎(chǔ)。
　　根據(jù)GenBank中HRV中國(guó)株非結(jié)構(gòu)蛋白（Non-virion perotein，NV）基因序列設(shè)計(jì)特異性引物，用RT-PCR方法擴(kuò)增NV基因，鑒定無(wú)誤后連接到大腸桿菌pColdⅠ載體中，構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒pColdⅠ-NV在大腸桿菌BL21（T1?）宿主菌中獲得高效表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物以可溶性蛋白存在。經(jīng)Ni