3133.炭樣小單孢菌jxnu1產抗生素jx對嗜根考克氏菌的拮抗作用機理研究

1、碩士研究生學位論文炭樣小單孢菌JXNU1產抗生素JX對嗜根考克氏菌的拮抗作用機理研究ThestudyonantagonismmechanismoftheantibioticsJXfromMicromonospacarbonaceaJXNU1againstKocuriarhizophila陳鵬陳鵬院所：生命科學學院導師姓名：謝建坤學科專業(yè)：微生物學研究方向：微生物的生理與代謝二○一六年六月分類號：號：071072密級：級：無學校代碼：學校

2、代碼：10414學號：號：2013010789I摘要炭樣小單孢菌JXNU1是一株具有廣譜抗菌活性的稀有放線菌，前期已系統(tǒng)地研究了該菌發(fā)酵產抗生素的工藝過程，建立了分離純化抗生素的方法，并獲得了層析純的單組分、粉末狀抗生素產品，經初步分析確定其為一核苷類抗生素。在此基礎上，本文對其抗菌機理進行了系統(tǒng)探究。主要研究結果如下：（1）研究了炭樣小單孢菌JXNU1產抗生素JX對嗜根考克氏菌的體外抗菌活性，結果表明，抗生素JX對嗜根考克氏菌的最低抑

3、菌濃度為3.64ugmL。12h后，抗生素JX對嗜根考克氏菌的殺菌率達到99.6%。顯微鏡觀察表明，抗生素處理后的菌體的形態(tài)變大。（2）DAPI染色結果顯示，DAPI可以和嗜根考克氏菌內的DNA和RNA結合，經過抗生素JX作用12h后，菌體內的DNA和RNA含量呈無明顯變化，表明抗生素JX對菌體核酸的合成無明顯影響。（3）分析了嗜根考克氏菌分別在0、12MIC、45MIC和MIC的抗生素JX作用下的細胞壁含量變化，發(fā)現(xiàn)在一定的抗生素濃度

4、范圍內，嗜根考克氏菌細胞壁的含量隨抗生素作用濃度增加而呈現(xiàn)上升趨勢，當抗生素濃度達到MIC時，嗜根考克氏菌細胞壁含量比對照組細胞壁增加了76.5%。由此可知，抗生素JX顯著促進了嗜根考克氏菌細胞壁的合成。（4）研究分析了嗜根考克氏菌在終濃度為0、12MIC、45MIC和MIC的抗生素JX作用下的蛋白質含量變化，發(fā)現(xiàn)在一定濃度范圍內，嗜根考克氏菌蛋白質的含量隨抗生素JX的含量增加而呈現(xiàn)下降趨勢。嗜根考克氏菌在不含抗生素的NB肉湯中培養(yǎng)時的

5、蛋白質含量為38mgg，而在MIC的抗生素條件下培養(yǎng)的細胞蛋白質含量為18mgg。由此可知，抗生素JX顯著抑制了嗜根考克氏菌蛋白質的合成。（5）采用iTRAQ技術對12MIC抗生素處理組和對照組的嗜根考克氏菌蛋白質組進行分析。結果發(fā)現(xiàn)了1780個蛋白中有149個差異表達蛋白，包括表達上調蛋白106個（上調倍數≥1.20，P≤0.05），表達下調蛋白43個（下調倍數≤0.833，P≤0.05）。在抗生素的脅迫下，肽聚糖合成相關酶MurG表