質(zhì)粒pSET152對小單孢菌40027菌株產(chǎn)福堤霉素A的影響.pdf

1、小單孢菌(Micromonospora)是一類能產(chǎn)生結(jié)構(gòu)類型多樣的抗生素的稀有放線菌。就小單孢菌近年來所產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)的數(shù)目，小單孢菌已超過鏈霉菌而位居首位。因此，小單孢菌屬作為尋找新抗生素和其它新生物活性物質(zhì)的一種新菌源受到越來越多的關(guān)注和重視，顯示出巨大的研究潛力。
　　 本文以小單孢菌40027原始菌株和小單孢菌40027::pSET152菌株為研究對象，通過比較小單孢菌40027原始菌株和小單孢菌40027::pSE

2、T152菌株在發(fā)酵過程的生物活性與發(fā)酵產(chǎn)物中的生物活性，研究了質(zhì)粒pSET152所攜帶的外源基因(acc(3)IV)對小單孢菌40027菌株所產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物-福堤霉素A的產(chǎn)量、結(jié)構(gòu)、功能之間的影響。
　　 采用超聲波細(xì)胞破碎法和反復(fù)凍融法對小單孢菌40027菌株的菌絲體進(jìn)行破碎，研究表明超聲波細(xì)胞破碎法破碎小單孢菌40027菌株的菌絲體效果比反復(fù)凍融法好，且經(jīng)驗(yàn)證小單孢菌40027菌株菌絲體內(nèi)所產(chǎn)生的少量的抗菌活性物質(zhì)包含有

3、福堤霉素A，但是胞外所產(chǎn)的生物活性物質(zhì)要高于胞內(nèi)。
　　 通過對小單孢菌40027菌株發(fā)酵工藝的研究，結(jié)果表明二級種子液制備至12h和發(fā)酵液制備至42h時(shí)，這2個(gè)時(shí)間分別為小單孢菌40027菌株種子培養(yǎng)期及發(fā)酵培養(yǎng)期的最佳時(shí)間。
　　 比較小單孢菌40027原始菌株和小單孢菌40027::pSET152菌株在相同培養(yǎng)時(shí)期的抑菌活性，研究發(fā)現(xiàn)在菌種活化時(shí)期、發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)期，小單孢菌40027 菌株抑菌活性比小單孢菌40027

4、::pSET 152的抑菌活性強(qiáng)。
　　 對小單孢菌40027菌株的發(fā)酵液分離純化工藝進(jìn)行研究，結(jié)果表明：小單孢菌40027菌株發(fā)酵所產(chǎn)福堤霉素A的飽和吸附量為6倍樹脂體積，0.5N的氨水洗脫液的用量為3倍樹脂體積。提取的粗產(chǎn)物采用TCL檢測，確定了氯仿-甲醇-濃氨水為1:2:1是小單孢菌40027菌株發(fā)酵產(chǎn)物的粗提物薄層層析的最佳展層系統(tǒng)。
　　 對1mg/mL福堤霉素A標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行色譜分析，采用示差折光檢測器和蒸發(fā)光散

5、射檢測器進(jìn)行檢測，表明了蒸發(fā)光散射檢測器檢測福堤霉素A的效果要優(yōu)于前者的檢測效果，且確定蒸發(fā)光散射檢測器的檢測條件為：0.2 mol/L三氟乙酸溶液與甲醇比例為95：5；流速為1.0mL/min；漂移管溫度為40℃；進(jìn)樣量為20μL；霧化氣體壓力為350kPa。在此條件下1mg/mL福堤霉素A標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間是7.20min。
　　 對小單孢菌40027::pSET152菌株和小單孢菌40027菌株的發(fā)酵純化產(chǎn)物經(jīng)高效液相色譜分離

6、，確定了小單孢菌40027::pSET152菌株和小單孢菌40027菌株的發(fā)酵所產(chǎn)福堤霉素A的保留時(shí)間分別為7.31、7.35 min，峰面積所占比例分別為11.9[％]、12.3[％]，表明了二者發(fā)酵產(chǎn)物中含有基本等量的福堤霉素A。結(jié)果暗示了二者之間抑菌活性的差別不是由于二者所產(chǎn)的福堤霉素A的含量不同造成的，而是由于質(zhì)粒pSET152所包含的acc(3)IV對福堤霉素A的結(jié)構(gòu)有不同程度的鈍化，引起福堤霉素A結(jié)構(gòu)變化，從而導(dǎo)致了福堤霉素