單孢雜交選育草菇耐低溫高產(chǎn)新菌株.pdf

1、草菇（Volvariella volvacea）是我國主要的栽培食用菌品種之一，原產(chǎn)自我國東南地區(qū)，是一種生長(zhǎng)在高溫高濕地區(qū)的草腐性食用真菌，其味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，具有重要的商業(yè)價(jià)值。草菇屬于高溫真菌，人工栽培耗能高，另外草菇的生物轉(zhuǎn)化率低（僅20％左右），這些嚴(yán)重阻礙了草菇產(chǎn)業(yè)規(guī)模的發(fā)展。
　　本研究主要目的是利用單孢雜交選育草菇耐低溫高產(chǎn)新菌株。首選進(jìn)行了出菇試驗(yàn)，從17株出發(fā)菌株中篩選得到高產(chǎn)草菇菌株，與耐低溫型菌株VH3

2、共同作為雜交親本；同時(shí)利用RAPD技術(shù)對(duì)出發(fā)菌株的遺傳多樣性進(jìn)行了分析。其次以草菇菌株VH3及其單孢菌株為材料，利用RAPD技術(shù)分析了單孢菌株和其親本菌株的差異；并且利用交配型基因標(biāo)記區(qū)分了出發(fā)菌株以及草菇單孢子的交配型。最后結(jié)合快速篩選耐低溫草菇菌種技術(shù)和交配型基因分子標(biāo)記鑒定草菇雜交子的方法完成了草菇雜交育種，最后獲得了一株耐低溫高產(chǎn)的草菇新菌株VV093。本研究的主要結(jié)果如下：
　　1.供試菌株品比試驗(yàn)分別統(tǒng)計(jì)了菌絲生長(zhǎng)速度

3、、原基出現(xiàn)時(shí)間、大量采收日期、子實(shí)體橫豎直徑及菌膜厚度、生物轉(zhuǎn)化率等農(nóng)藝性狀。主要以生物轉(zhuǎn)化率為標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)量最高的菌株分別是屏優(yōu)1號(hào)、0229、Vn-1和Z-V23，其生物轉(zhuǎn)化率分別為21.73%、18.58%、16.36%和15.99%。同時(shí)綜合考慮其他農(nóng)藝性狀，0229的菌膜厚度最薄，最易開傘，不宜作為雜交親本。所以初步選擇屏優(yōu)1號(hào)、Vn-1以及Z-V23這三個(gè)高產(chǎn)菌株作為雜交高產(chǎn)親本。
　　2.供試菌株遺傳多樣性分析主要是基于

4、RAPD技術(shù)進(jìn)行的。35條隨機(jī)引物中，有9條引物擴(kuò)增條帶清晰穩(wěn)定、可重復(fù)性好，這9條引物被用于接下來的RAPD分析。分析結(jié)果表明供試草菇菌株遺傳相似系數(shù)0.68到1.00之間。當(dāng)遺傳相似系數(shù)為0.784時(shí)，供試菌株可以被分為四組?；诮慌湫突虻亩鄳B(tài)性分析表明，試草菇菌株的交配型類型主要有三種，分別是A1A2、A3A4、A5A6。屏優(yōu)1號(hào)的交配型為A1A2，泰國NO.1、Vn-1和Vn-3交配型為A5A6，其他菌株為A3A4。結(jié)合供試菌

5、株品比試驗(yàn)結(jié)果，最終選擇屏優(yōu)1號(hào)、Vn-1為高產(chǎn)親本。
　　3.從菌落形態(tài)、菌絲生長(zhǎng)速度和RAPD方法研究了草菇菌株VH3和它的14個(gè)單孢菌株的生長(zhǎng)發(fā)育和遺傳變異。研究表明，草菇菌株 VH3和它的單孢菌株在菌落形態(tài)、菌絲生長(zhǎng)速度方面存在明顯差異。供試菌株的菌落形態(tài)有氣生型和匍匐型兩種，菌絲長(zhǎng)勢(shì)也各不相同；單孢菌株的菌絲生長(zhǎng)速度和親本菌株VH3也不相同，單孢菌株中V4和V10的菌絲生長(zhǎng)速度最快。同時(shí)RAPD指紋分析表明在基因水平，草

6、菇菌株VH3和它的單孢菌株存在一定的遺傳差異。從35條隨機(jī)引物中篩選出9條擴(kuò)增條帶多態(tài)性較好、穩(wěn)定性較強(qiáng)的引物進(jìn)行RAPD分析，得到的遺傳相似系數(shù)聚類圖表明親本菌株和單孢菌株的平均遺傳相似系數(shù)在0.50左右，供試菌株遺傳差異較大。草菇VH3菌株和單孢后代的表型和基因型差異表明VH3菌株通過有性生殖產(chǎn)生了豐富的生物學(xué)變異。
　　4.利用交配型標(biāo)記區(qū)分親本單孢菌株的交配型，進(jìn)行單孢雜交，利用快速篩選耐低溫草菇菌株技術(shù)與交配型標(biāo)記鑒定雜

7、交子技術(shù)而獲得耐低溫的草菇雜交子。出菇試驗(yàn)表明，利用交配型標(biāo)記輔助雜交的方法可以高效地篩選出真實(shí)雜交子；并且該標(biāo)記的使用也有助于雜交子的結(jié)實(shí)（結(jié)實(shí)率高）；在28℃出菇溫度下，雜交菌株 VV093的生物轉(zhuǎn)化率相較于親本菌株有了顯著的提高，并且綜合農(nóng)藝性狀較優(yōu)良。因此，利用交配型標(biāo)記輔助單孢雜交的方法可以高效地選育出耐低溫高產(chǎn)草菇新菌株。
　　5.對(duì)出菇試驗(yàn)所統(tǒng)計(jì)的農(nóng)藝性狀進(jìn)行了相關(guān)性分析，可以得出：原基出現(xiàn)時(shí)間和采收時(shí)間呈顯著的正相