文昌魚分子生物學：AmphiSRP19、AmphiLysC與AmphiS19基因克隆、表達和進化研究.pdf

1、文昌魚(Amphioxus)是介于無脊椎動物和脊椎動物之間的過渡類型,是研究動物進化和胚胎發(fā)育的典型材料.利用分子生物學手段,研究文昌魚有關基因的結(jié)構(gòu)、進化和表達,可以揭示文昌魚發(fā)育的分子生物學機制,有助于我們從分子水平上來了解脊椎動物的起源和進化.該文從青島文昌魚(Branchiostoma belcheri tsingtaunese)腸cDNA文庫(該實驗室保存)中,克隆了具有完整編碼框的信號識別顆粒SRP19(AmphiSRP19

2、)、溶菌酶(AmphiLysC)和核糖體蛋白S19(AmphiS19),并對其結(jié)構(gòu)、表達和進化展開了研究.C型溶菌酶基因廣泛存在于脊椎動物和無脊椎動物中,但是在原索動物門尾索類中,卻沒有發(fā)現(xiàn)C型溶菌酶基因的存在.我們從頭索動物文昌魚中首次克隆到了C型溶菌酶基因cDNA序列,命名為AmphiLysC.該基因全長651bp,編碼一個140個氨基酸組成的蛋白質(zhì).在編碼框兩側(cè)設計引物,擴增青島文昌魚基因組DNA,得到兩個片段,分別命名為A mp

3、hiLys1和AmphiLys2.AmphiLys1全長2350bp,其基因結(jié)構(gòu)與脊椎動物C型溶菌酶基因相同,即有4個外顯子和3個內(nèi)容子組成.AmphiLys2全長1451bp,有5個外顯子和4個內(nèi)含子組成,在第2和第3個內(nèi)含子兩端缺少RNA正確剪切所必需的識別位點(GT/AG).所以,我們不能排除AmphiLys2是假基因的可能.文昌魚C型溶菌酶具有消化型溶菌酶的主要特點如等電點偏低(5.96),最適pH為酸性(5.5).對不同類型的

4、溶菌酶(包括C型、I型和G型)進行系統(tǒng)進化分析,發(fā)現(xiàn)來自不同物種的C型、G型和I型溶菌酶各自聚集成簇,AmphiLysC與無脊椎動物C型溶菌酶聚在一起.該文最后一部分對文昌魚核糖體蛋白S19基因進行了序列比較和系統(tǒng)進化分析.AmphiS19全長609bp,編碼一個147個氨基酸組成的蛋白,分子量為16,222Da,pI為10.44.AmphiS19與其他13種真核生物S19進行序列比對,發(fā)現(xiàn)AmphiS19與脊椎動物S19的相似性大于7