文昌魚promethin-like基因克隆和表達模式的研究.pdf

1、文昌魚是現(xiàn)存的與脊椎動物原始祖先最接近的頭索動物，一直被認為是研究脊椎動物起源和進化的模式動物。文昌魚的基因序列和表達模式已經被廣泛用于不同物種之間的比較基因組學研究和發(fā)育同源性分析。本文從青島文昌魚(Branchiostoma belcheri tsingtaunese)腸cDNA文庫中，克隆了具有完整編碼框的胞質蛋白promethin-like基因，并對其結構、定位、進化和表達進行了研究，并首次嘗試其功能的探索。 首先，從青

2、島文昌魚消化道cDNA文庫中克隆了全長為1014bp的文昌魚promethin-like cDNA，最大開放閱讀框編碼167個氨基酸的蛋白質，理論分子量為18 kDa，該cDNA編碼的蛋白還沒有明確的保守結構域，這點與已報道的人和鼠的promethin相似。文昌魚promethin-like和哺乳動物、鳥類和兩棲類的promethin序列同源性相近(20-29％)，沒有明顯差異。通過構建promethin蛋白家族系統(tǒng)進化樹分析可知，青島

3、文昌魚位于脊椎動物基部，這與脊索動物是脊椎動物的祖先的觀點相一致。TMHMM Server v．2.0軟件分析結果顯示，文昌魚promethin-Like為跨膜蛋白，且與人、鼠、蛙等脊椎動物相同，都具有3個跨膜區(qū)域。上述分析表明，文昌魚promethin-like可能代表了脊椎動物promethin的原型，且約5.5億年前脊椎動物和無脊椎動物從共同祖先分化以后，包括人在內的脊椎動物promethin變異不大。 其次，Northe

4、rn結果顯示，promethin-like在文昌魚肝盲囊、后腸、鰓、精巢、卵巢組織中的轉錄產物為一條帶，大小為1014bp。切片原位雜交分析表明，promethin-like在成體文昌魚組織中呈特異性表達，在鰓、肝盲囊和后腸表達量較高，在卵巢、精巢、神經管中的表達量較低，與Northern結果基本一致。切片原位雜交以及Northern結果也提示我們，文昌魚promethin-like和哺乳動物promethin組織表達相似，即可能在體內